青鱼胰蛋白酶的分离纯化及部分性质研究.pdf

维普资讯
安徽农业科学...,:—, 责任编辑金琼琼责任校对马君叶
青鱼胰蛋白酶的分离纯化及部分性质研究
陈荣昌,杜泓璇,马尧,羊芹,唐云明西南大学生命科学学院,重庆
摘要目的为青鱼的养殖和综合利用提供试验依据。方法对青鱼胰蛋白酶进行分离纯化,测定青鱼胰蛋白酶的分子量、热稳定性
和酸碱稳定性,探讨值、温度、金属离子和对青鱼胰蛋白酶活力的影响。【结果】经和凝胶过滤,测得青鱼胰蛋白
酶的分子量分别为和.。青鱼胰蛋白酶具有一定碱性耐受性,在值为—时活性较高,其最适值约为,最适反应
温度为℃。以酪蛋白为底物,在值.、℃时测得该酶值为.。对该酶有明显促进作用,而、“、和
对青鱼胰蛋白酶的抑帝】作用很大。『结论能抑制青鱼胰蛋白酶的作用,说明该酶可能为金属蛋白酶。
关键词青鱼;胰蛋白酶;分离纯化;性质
中图分类号. 文献标识码文章编号——

.,

.【,
...
. ..
. 肘.—.
℃..℃.
.×/. .“, “
. 『,
.
;;;
青鱼是四大家鱼之一,其肉质于./,℃透析过
鲜美,营养丰富且容易养殖,是一种很好的经济动物。有研夜,于透析液中加入预冷的正丁醇进行脱脂,正丁醇终浓
究报道青鱼的胰脏蛋白酶活性较高。青鱼内脏蛋白酶的相度为% : ,然后/离心,弃正丁醇
关研究可为青鱼饲养的饲料配给提供相关信息,也可以为层,得粗酶液。
青鱼内脏的合理回收及应用提供理论基础。蛋白酶在食品、.. 青鱼胰蛋白酶的分离纯化。
医药、化工及皮革制造等方面有重要的用途。鱼类的内脏一—离子交换层析。用倍床体积的
般作为下脚料,其中的资源未得到充分利用。目前尚未见青../,,上样量
鱼胰蛋白酶分离纯化方面的报道。笔者对青鱼胰蛋白酶进,先用个床体积的—./,值.
行分离纯化,并对其基本性质进行了研究,旨在为青鱼的缓冲液洗掉未结合的蛋白,然后用./的—
养殖及综合利用提供试验依据。含浓度~/溶液,
材料与方法液进行梯度洗脱,流速/,/管,紫外监测波长为
. 材料供试青鱼购于重庆北碚水产市场。试剂:—;测定各管的蛋白酶活性和蛋白质含量;收集活性较
、凝胶、核糖核酸酶、糜蛋白酶原高的各管酶液,℃透析过夜,冷冻干燥备用。
、卵白蛋白、牛血清白蛋白、醇醛缩合酶和蓝色葡聚凝胶过滤柱层析。用倍床体积的
等为产品;丙烯酰***为产品;蛋·浓度./,,上
白标准品为上海普洛麦格生物产品有限公司产样量。用浓度.,,
品;十二烷基硫酸钠和四***乙二***为产品;其他行洗脱,流速./,/管;测定每管蛋白酶活性和
试剂为国产分析纯。蛋白质含量。收集活性较高的各管酶液,℃透析过夜,冷冻
. 方法干燥,得蛋白酶纯品。
.. 粗酶液的制备。鱼购回后,立即取出内脏,清理干净, .. 蛋白酶活性测定。采用分光光度法:以酪蛋白为底
取下胰脏,用滤纸吸去水并称重。按::的比例加入预物,取%/酪蛋白,
冷的浓度./缓冲液值.,用高速/,,于℃恒温水浴预热,再
组织捣碎机捣碎转速后,℃抽提;,%三***
,℃,,收集上清液;