超氧化物歧化酶活性测定.doc

聿超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定蚇一、原理袈将25℃时抑制邻***自氧化速率50%所需的SOD定义为一个活力单位。在碱性条件下,邻***会发生自氧化,可根据SOD抑制邻***自氧化能力测定SOD活力。薄二、试剂蚃1、A液:***氨基甲烷-盐酸缓冲液(内含1mmol/LEDTA·2Na)。***·,用蒸馏水定溶至100ml。蒈2、B液:***盐酸溶液。称取邻***,并定容至100ml。蚅3、盐酸溶液:10mmol/l蚂4、蒸馏水:二重石英蒸馏水。膂三、仪器膈1、紫外-可见分光光度计;蚆2、精密酸度计,;肅3、离心机;薂4、10ml比色管;罿5、10ml离心管;螈6、玻璃乳钵。膃四、测定步骤羁1、,,移入10ml离心管。用少量蒸馏水冲洗研钵,洗液并入离心管中,加蒸馏水至刻度,经4000r/min离心15分钟,取上清液测定。虿2、在25℃左右,,,。加入B液立即混合并倾入比色皿,分别测定在325nm波长条件下初始时和1Min后吸光度值,二者之差为邻***自氧化速率△A325(min-1)。薅3、在25℃左右,,,,。加入B液立即混合并倾入比色皿,分别测定在325nm波长条件下初始时和1分钟后吸光度值,二者之差为样液或酶液抑制邻***自氧化速率△A′325(min-1)。加入样液或酶液的量使抑制邻***自氧化速率为1/2△A′325(min-1),。薆五、计算结果蒀葿式中:薇V—加入样液或酶液的体积,ml蚄△A325—邻***自氧化速率袀△A′325—样液或酶液抑制邻***自氧化速率膀D—样液或酶液的稀释倍数蚈V1—样液总体积