超氧化物歧化酶活性测定.doc

螁超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定蒆一、原理羇将25℃时抑制邻***自氧化速率50%所需的SOD定义为一个活力单位。在碱性条件下,邻***会发生自氧化,可根据SOD抑制邻***自氧化能力测定SOD活力。羅二、试剂膀1、A液:***氨基甲烷-盐酸缓冲液(内含1mmol/LEDTA·2Na)。***·,用蒸馏水定溶至100ml。芆2、B液:***盐酸溶液。称取邻***,并定容至100ml。螅3、盐酸溶液:10mmol/l肃4、蒸馏水:二重石英蒸馏水。薀三、仪器羇1、紫外-可见分光光度计;螆2、精密酸度计,;膁3、离心机;聿4、10ml比色管;蚇5、10ml离心管;袇6、玻璃乳钵。薄四、测定步骤葿1、,,移入10ml离心管。用少量蒸馏水冲洗研钵,洗液并入离心管中,加蒸馏水至刻度,经4000r/min离心15分钟,取上清液测定。蒇2、在25℃左右,,,。加入B液立即混合并倾入比色皿,分别测定在325nm波长条件下初始时和1Min后吸光度值,二者之差为邻***自氧化速率△A325(min-1)。蚅3、在25℃左右,,,,。加入B液立即混合并倾入比色皿,分别测定在325nm波长条件下初始时和1分钟后吸光度值,二者之差为样液或酶液抑制邻***自氧化速率△A′325(min-1)。加入样液或酶液的量使抑制邻***自氧化速率为1/2△A′325(min-1),。蚂五、计算结果膂膈式中:蚆V—加入样液或酶液的体积,ml肅△A325—邻***自氧化速率薁△A′325—样液或酶液抑制邻***自氧化速率羈D—样液或酶液的稀释倍数蒃V1—样液总体积