响应面法优化地衣芽孢杆菌A2发酵培养基.doc

葿响应面法优化地衣芽孢杆菌A2发酵培养基袆袂为了提高地衣芽孢杆菌A2(BacilluslicheniformisA2)发酵液的活菌含量,采用Hackett-Burman设计法和响应面分析法对其发酵培养基进行优化。先用Plackett-Burman设计从8种原料中筛选出对活菌含量有显著影响的因素,再用最陡爬坡试验及Box-behnken设计进一步优化。羀结果表明,MgSO4·7H2O、酵母粉和尿素是影响发酵液活菌含量的显著因素,优化后的培养基为:可溶性淀粉5g/L,,K2HPO46g/L,KH2PO43g/L,MnSO4·,MgSO4·,豆粕10g/。袀在此条件下,×10^10CFU/×10^11CFU/mL。莄酵母菌的培养袅大多数酵母菌为腐生,,常见于含糖分较高的环境中,例如果园土、菜地土及果皮等植物表面。酵母菌生长迅速,易于分离培养,在液体培养基中,酵母菌比霉菌生长得快。肀羇利用酵母菌喜欢酸性环境的特点,常用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液(这样做的好处是酸性培养条件则可抑制细菌的生长),然后在固体培养基上用划线法分离之。肆蚄常用的培养基有:腿(一),一般为10-15波林。(1)用水将大麦或小麦洗净,用水浸泡6-12h,置于15℃阴凉处发芽,上盖纱布,每日早、中、晚淋水一次,待麦芽伸长至麦粒的两倍时,让其停止发芽,晒干或烘干,研磨成麦芽粉,贮存备用。蝿(2)取一份麦芽粉加四份水,在65℃水浴锅中保温3-4h,使其自行糖化,直至糖化完全(,加2滴碘液,如无蓝色出现,即表示糖化完全)。芆(3)糖化液用4-6层纱布过滤,滤液如仍混浊,可用鸡蛋清澄清(用一个鸡蛋清,加水20m1,调匀至生泡沫,倒入糖化液中,搅拌煮沸,再过滤)。膂(4)用波美比重计检测糖化液中糖浓度,将滤液用水稀释到10-15波林,。如当地有啤酒厂,可用未经发酵,未加酒花的新鲜麦芽汁,加水稀释到10-15波林后使用。艿(5)如配固体麦芽汁培养基时,加入2%琼脂,加热融化,补充失水。膀(6)分装、加塞、包扎。羈(7)高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min。芅(二)马铃薯葡萄糖培养基的配制荿1、-(1)配制20%马铃薯浸汁取去皮马铃薯200g,切成小块,加水1000m1。80℃浸泡lh,用纱布过滤,然后补足失水至所需体积。100Pa灭菌20min。即成20%马铃薯浸汁,贮存备用。螃(2)配制时,按每100m1马铃薯浸汁加入2g葡萄糖,加热煮沸后加入2g琼脂,继续加热融化并补足失水。膈(3)分装、加塞、包扎。薅(4)高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min。螅(三)-(1)称新鲜黄豆芽10g,置于烧杯中,再加入100m1水,小火煮沸30min,用纱布过滤,补足失水,即制成10%豆芽汁。肂(2)配制时,按每100m110%豆