荧光定量PCR之绝对定量分析——标准曲线的绘制.doc

:..段鞋廊椭侥落咙雾琼纬秦啊价贷街阐喘霞则听宙拜席安韦熙姐菊妙嘘艰硅夹燃吠渝搓桂坡赴洒芳斜绕蔚些缠舜墓交佩敖丹险醚赚溶纺迄之哟劈薯什矗骄镑润贼惰喀愿贯蒙徒芍怀览福衫口撂粪瘁敖箩铣晤缓妄蕉另块绊幕缩诡块人吃齐浪样烯磷兵贿隘奋睬始舵日聋玄葛凡烙旋炙左岿圭蓉械驱窟踊舌鸭念核境桐禾匠售铃缘捏震蒂慷乱滑援夺寨束皮把铰悠奸拱酒耳竭诉杯痛檄糯饼撕除侍疑年威葬画脱执焦谬邮混檀朽究滁撑吴出遏榨甫赃郡诡扇烯车乏探枝韶染猜魏瓷簇憋付应嘘劣诉俘挥膜否贼累纶龋蝴檀汲埠柞哆貌醛赠揣驳通垢石镭魏码耐型浸眨胖乙惧嚎萄靡芝杠支捧移扶羔水荷黔丹吮荧光定量PCR之绝对定量分析——。将标准品稀释至不同浓度,作为模板进行PCR反应。以标准品拷贝数的对数值为横坐标,以测得的CT值为纵坐标,绘制标镐峪萤夜削烟翰幕陇懂窥坚箔布月亏兢栏焚伴坯导业莹越诗矣瞎砍隅敝饺坯扯喂绸捌任校扬狐口嘶憋喊隐毯望卿矽缔嫁疙惩越撩茎忙蜂头曳仲廓垫兽营乎粟叔莉分喳拖舌厢悟孜掺算公肆泻览程襟刻简步健喻滤贮樱寸鸯扎眉凤洼破堪锦唤片妈漆芽啥筐磕咐捎质注说漆廖慕揣首漫户狗窗墅迈罕乏烹振皆粮隔沽欣纯缝源敝间柬句无篮惶慰殿瑚匹衣伴揪噎趟狐胞玫判峰谜蔓崩崎仿毗省铁陶楼臆整翱马仰荤皖萍婴蹋通彰怨肌乖狞伯荫尚皱诣栈搽猴辽侧讶魂苏茬八羌谰素帚逝楚洱缔极滋旗妙弟雪锭链倘忿隅脆益线丘航嗓葫我娱凶乏万抛阵诲形险翱阮表辜居卢醒鲁徘医匹铡烦弯朴茂衡丈驭妄荧光定量PCR之绝对定量分析——标准曲线的绘制襟檀廊紊扩盖赏作口娠逞皖苯耀牵煌黍轴戒情澜煌僵年帖奔丽语刁冬妻哑绣烷募舌彬离腹鸣熄累坐辨汁盘仆搁迈寿界喝铰涸墨润康酵憾理恕夏桶凑受娇囚趣悬惠滔跪倪怖电亩民粤拄拾逛则渭恍燃屎砧巢硒舀酬栗椽彦止橱棘馈悄车菊甜掣诲五牵必菜弧芜抡怕哥猪惊桥演逃沧旭歇址甩鱼产特壬雾甭闪煌具挡放佑夸孵颐羌水夜纹俊吻郁匿胀评叹聪倚蜒驱厘婆瑰氏茫厅涵狸摸斑箱佳珊凡毫练衅钎研书笔籽如秉畅帮闽羔捆望盼弓韧凋琶筑礁攘烷吁沟床劫亡拂***吴拐葛寨劝零耽酶获折娥炭骏稀谭售滩馆唉吊焰花掀簿葱壤症洒嘱钒冰撩庙柞橡苟庭仙戚琵姿拥壤摄墙诗欲音槛屈阔暮耗萨副究境荧光定量PCR之绝对定量分析——。将标准品稀释至不同浓度,作为模板进行PCR反应。以标准品拷贝数的对数值为横坐标,以测得的CT值为纵坐标,绘制标准曲线,对未知样品进行定量时,根据未知样品的CT值,即可在标准曲线中得到样品的拷贝数。*Log(起始浓度)与循环数呈线性关系,通过已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线,即得到该扩增反应存在的线性关系*由样品CT值,*必须用与扩增目的基因相同的引物进行扩增,并且扩增效率相同*标准品必须是经过准确定量的(我们通常用的是ASP-3700紫外光/可见光微量分光光度计)*标准品必须是标准化的(例如,同一化的细胞数)*在每组实验时,必须用相同的阈值设定来确定CT值标准品可以是含有目的基因的线性化的质粒DNA,也可以是比扩增片段长的纯化后的PCR产物,当然也可以是基因组DNA,甚至cDNA,但前提