植物品种鉴定　MNP标记法征求意见稿.docx

GB/TXXXXX———MNPmarkermethod(征求意见稿)国家市场监督管理总局中国国家标准化管理委员会发布发布201X-XX-XX发布201X-XX-XX实施前言本标准按照GB/—2009给出的规则起草。本标准由中国标准化研究院提出并归口。本标准起草单位:本标准主要起草人:植物品种鉴定 MNP标记法1范围本标准规定了植物品种鉴定多核苷酸多态性(MNP)标记法的原理、试剂或材料、仪器设备、测定步骤、结果分析。本标准适用于水稻、玉米、大豆、棉花、花生、谷子、西瓜、甜瓜、黄瓜、艾草、番茄、辣椒、白菜、龙眼、荔枝、猕猴桃的原始品种鉴定、实质性派生品种鉴定和品种真实性鉴定。其他植物品种鉴定可参考此标准。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改版)适用于本文件。GB/。,MNP在基因组水平上由多个核苷酸引起的序列多态性。,EDV由原始品种派生或者由原始品种的实质性派生品种再次派生,且保留了原始品种的基因型或基因型组合产生的基本特性,但与原始品种存在明显差别的品种。(非典型植物)占总观测植株的百分率。。。4原理利用多重PCR和二代高通量测序扩增并检测样品基因组上的MNP标记位点,分析测序数据,获得标记位点的分型结果和鉴定结论。5试剂或材料除非另有规定,仅使用分析纯试剂。:GB/T6682一级。。。:见附录A。。。。。。。。,最小样品进样量为1μL。。,2μL、10μL、20μL、100μL、200μL和1000μL。。、DNA提取、多重PCR扩增与文库构建、高通量测序在规定的区域按单一方向进行操作且保持实验室通风良好。不同区域的仪器设备应专用。%的植物品种群体中抽取的个体样本混合物。。、根、茎、胚等器官或组织,也可为种子。。农作物种子扦样应符合GB/。;;DNA电泳主带明显,无明显降解和RNA残留。、多重PCR扩增、文库构建与纯化。其中,多重PCR的扩增循环数不高于20个。。高通量测序的平均覆盖倍数设置为700倍以上,测序长度大于标记引物在参考基因组上的扩增长度。,统计第一次检测的标记位点的平均覆盖倍数C1。当C1<500时,判定样品的测序数据量不足,≥500。当C1≥500时,进一步计算检出的标记位点的比例R1=T1T,其中,T1和T分别为样品的检出的标记位点的数目和检测的标记位点的数目。当R1≥95%时,判定测序数据合格。当R1<95%时,判定文库构建可能失败,≥500。当C2≥500时,进一步计算第一次和第二次共同的检出的标记