过氧化氢酶活力的测定实验报告.docx

过氧化氢酶活力的测定实验报告篇一:过氧化氢酶活性测定实验29过氧化氢酶活性测定(高锰酸钾滴定法) 过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中,其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系,故常加以测定。一、原理过氧化氢酶(catalase)属于血红蛋白酶,含有铁,它能催化过氧化氢分解为水和分子氧,在此过程中起传递电子的作用,过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量(反应过量)的过氧化氢溶液,经酶促反应后,用标准高锰酸钾溶液(在酸性条件下)滴定多余的过氧化氢。即可求出消耗的H2O2的量。二、材料、仪器设备及试剂(一)材料:小麦叶片(二)仪器设备:;;;;。(三)试剂:%H2SO4;;:取KMnO4(AR),用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml,;%,取30%,稀释至1000ml,(在酸性条件下)进行标定;:,用蒸馏水溶解后,定容至1000ml。三、实验步骤(一)酶液提取:,研磨成匀浆,转移至25ml容量瓶中,用该缓冲液冲洗研钵,并将冲洗液转至容量瓶中,用同一缓冲液定容,4000rpm离心15min,上清液即为过氧化氢酶的粗提液。(二)取50ml三角瓶4个(两个测定,另两个为对照),,,,同时计时,于30℃恒温水浴中保温10min,立即加入10%。,至出现粉红色(在30min内不消失)为终点。四、结果计算酶活性用每g鲜重样品1min内分解H2O2的mg数表示: 过氧化氢酶活性(H2O2mg/g/min)=(A-B)×VT/ 式中:A对照KMnO4滴定ml数;B酶反应后KMnO4滴定ml数;VT提取酶液总量(ml); VS反应时所用酶液量(ml);W样品鲜重(g);t反应时间(min); 。过氧化氢酶的活性测定在植物体中,黄素氧化酶类的代谢产物常包含H2O2,如光呼吸中的乙醇酸氧化酶、呼吸作用中的葡萄糖氧化酶、氨基酸氧化酶、醛氧化酶等。H2O2的积累可导致破坏性的氧化作用, 而过氧化物酶和过氧化氢酶则可以清除H2O2,是植物体内重要的活性氧清除系统之一。其活性还与植物的抗逆性有密切关系,本实验利用高锰酸钾滴定法测定过氧化氢酶活性。一、原理:过氧化氢酶属于血红蛋白酶,含有铁,它能催化过氧化氢分解为水和分子氧, 在此过程中起传递电子的作用,H2O2则既是氧化剂,又是还原剂。 R+H2O2=====R2 R2+H2O2===R2+2H2O+O2 合并上式:2H2O2====2H2O+O2 据此,可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量(反应过量)的过氧化氢溶液,经酶促反应后,用标准高锰酸钾溶液(在酸性条件下)滴定多余的过氧化氢。 5H2O2+2KMnO4+4H2SO4→5O2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4 即可求出消耗的H2O2量。二、仪器和用具:研钵、三角瓶50cm3×4、铁架、酸式滴定管、恒温水浴、容量瓶三、试剂: 10%H2SO4;; :,用 ; :市售30%,取30% 1000ml,(在酸性条件下)进行标定。四、方法: :,研磨成匀浆,转移至25ml 容量瓶中,将研钵冲洗干净,冲洗液转移至容量瓶中,并用同一缓冲液定容,4000rpm离心, 上清液即为过氧化氢酶粗提液。 (两个测定两个对照),,对照为煮死酶液 ;,同时计时间,于30℃恒温水浴中保温10分钟,立即加入10%。 ,至出现粉红色(在30