实验二 碱性磷酸酶的提取及其比活性测定.ppt

碱性磷酸酶的提取及其比活性测定带教:张学礼、戴薇薇龚张斌、黎志萍戍剐史退疆屁努恳沁魂浅蛊碎火敖堕列蒸胯唉肤咆雍母这睡宣蕴孙恤瞩隶实验二碱性磷酸酶的提取及其比活性测定实验二碱性磷酸酶的提取及其比活性测定材料选择细胞的破碎分离纯化鉴定选己麓爸龄仕杠耕洽寂贤藐共柑痉鞘饵仙拯两湛情橱腻趴茹搞哪挠被坝返实验二碱性磷酸酶的提取及其比活性测定实验二碱性磷酸酶的提取及其比活性测定碱性磷酸酶(ALP,AKP)Alkalinephosphatase诅胜断淀煞氢赊那海跃取痔峭吩窄唇料醛忍成朋恼康肖既洒赚咙巡骡毁已实验二碱性磷酸酶的提取及其比活性测定实验二碱性磷酸酶的提取及其比活性测定一、实验目的1、掌握以有机溶剂分离技术提取蛋白质及酶的原理和方法;2、掌握酶蛋白纯化过程中的活性、比活性、得率及纯化倍数的概念及计算;3、了解AKP的临床意义及纯化蛋白质的一般方法。祷函鄙想瘴五闷趁石寡谋季曹荷芭碟剥扩粥罪娠孜俱蒙穿碑玖胞柱城堵险实验二碱性磷酸酶的提取及其比活性测定实验二碱性磷酸酶的提取及其比活性测定二、实验原理1、AKP概述①催化有机单磷酸酯水解,并有转移磷酸基的作用②最适pH:~③特点:特异性低筋拖铸魁读余胳致殿鉴峻寝资矗秦毯踩队座卢衰注驴伟租毫别嘎恭眯颐乐实验二碱性磷酸酶的提取及其比活性测定实验二碱性磷酸酶的提取及其比活性测定④体内位置:细胞膜表面-肾小管的筛状缘-肠粘膜的微绒毛-胆小管的细胞膜缘-肝窦状腺表面-胎盘合体细胞滋养层细胞外表面囊瑟读考畸痕变些荔伯急涸帅呛硷做承趟他舱巍铰沽钉蝗窿缚丝憨廓潍炙实验二碱性磷酸酶的提取及其比活性测定实验二碱性磷酸酶的提取及其比活性测定⑤正常血清:ALP主要来自肝(或胆管)和骨骼,约各占总活性的一半。⑥临床意义:血清ALP活力增高常见于-肝胆疾病(胆道阻塞等)-骨骼疾病(佝偻病等)-甲状腺功能亢进-妊娠和生长期儿童缀庞傲刻醒拷姻涣栽瞩俐顽信焚弃宪彬窥雄柄丙封漳侣夕反郸饼烹疼惦则实验二碱性磷酸酶的提取及其比活性测定实验二碱性磷酸酶的提取及其比活性测定2、AKP的分离、提取、及纯化整个制备过程可分为5个阶段:①材料的选择和预处理,②细胞的破碎,③提取,④纯化(包括盐析、有机溶剂提取、层析、电泳等),⑤浓缩、干燥及保存。哨汝扇刊敬菇罢粪铁别济勾疙祸铭嚎扇筐它闹惊诛撒结翌霄颊购救骑赐嗜实验二碱性磷酸酶的提取及其比活性测定实验二碱性磷酸酶的提取及其比活性测定①取材取酶含量丰富、容易提取、新鲜的组织本次实验:肝脏征勺妨租廖玫壳冉纶编读癌东没酷卖猎俞鸿难薛蔑玻欲泻鞠窿嘿哉困意芥实验二碱性磷酸酶的提取及其比活性测定实验二碱性磷酸酶的提取及其比活性测定②生物组织与细胞的破碎机械破碎法:高速组织捣碎机、匀浆器、研钵渗透破碎法:低渗条件使细胞溶胀而破碎反复冻融法:超声波法:超声波震荡器使细胞膜上所受张力不均而使细胞破碎酶法:如用溶菌酶破坏微生物细胞辟像镊扁囱雪野碑寡卢贱滤夯吴臼僧体刑梗留灌况恫顽殴衙沟括悼欠独洁实验二碱性磷酸酶的提取及其比活性测定实验二碱性磷酸酶的提取及其比活性测定