小鼠骨髓细胞染色体.ppt

骨髓细胞染色体的制备与观察骨髓细胞染色体的制备与观察2010级生物技术专业——冯德实验目的实验原理实验用品实验方法实验目的初步掌握小白鼠骨随细胞染色体的制备方法,,具有较高的分裂能力。本实验采用这一材料,通过前处理,低渗,固定,制片,染色等步骤制得染色体标本,可观察到许多处于分裂中期的染色体实验原理制备方法应注意以下几点:,使细胞分裂停滞在中期,,以至于在滴片时细胞被胀破,,经Giemsa :小白鼠(2n=42).:显微镜、冰箱、恒温箱、恒温水浴锅、离心机、注射器、解剖剪、镊子、移液器、载玻片、烧杯等。:%(W/V)秋水仙素、2%(W/V)柠檬酸钠溶液、***化钾溶液、(%***化钾溶液)、蒸馏水、Giemsa原液,甲醇、乙酸等。实验步骤预处理——取股骨——冲洗骨髓——离心——低渗——离心——固定——离心——滴片——染色——观察1. 取材及前处理:取健康小白鼠(约65-90天龄),%,剂量为4ml/Kg动物体重2. 取骨髓:将已用秋水仙素前处理的小白鼠,经过2-3小时后,用损伤脊椎法处死小白鼠,立即取出两侧股骨,把肌肉刮净,然后从骨股两端关节处剪下,用2%柠蒙酸钠溶液洗净骨股上的血污及肌肉残渣,剪去骨股两端膨大的关节头,使其露出骨髓,然后用吸有3-5ml2%柠檬酸钠溶液的注射器,从股骨的一端插入针头,往骨髓内冲洗多次,直至股骨断面变成粉白色为止,可多剪几个断面反复冲洗,这样制备了骨髓细胞悬浮液,也可用眼科镊子小心地取出骨髓,置于有少量柠檬酸钠溶液培养皿中捣碎,然后再加入2%柠檬酸钠溶液适量,制成3-5ml骨髓细胞悬液3. 低渗处理:用吸管将骨髓细胞悬液移入带刻度离心管内,1000rpm离心10分钟,吸去上清液。***化钾溶液5ml立即将细胞团吹打均匀,置37℃水浴25-30分钟4. 4. 预固定、固定:经低渗处理后的细胞,加入卡诺氏固定预固定、固定:经低渗处理后的细胞,加入卡诺氏固定液液5-65-6滴搅拌均匀进行预固定滴搅拌均匀进行预固定101