小鼠骨髓细胞染色体.ppt

小鼠骨髓细胞染色体标本的小鼠骨髓细胞染色体标本的制备与观察制备与观察实验目的: 实验目的: 1 。.初步掌握动物骨髓细胞染色体的制备方法。 2 。.了解小鼠骨髓细胞染色体的形态特点。实验原理: 实验原理: 染色体是细胞分裂时期遗传物质存在的特定染色体是细胞分裂时期遗传物质存在的特定形式,是染色质紧密包装的结果。染色体形式,是染色质紧密包装的结果。染色体是有机体遗传信息的载体,对染色体的研是有机体遗传信息的载体,对染色体的研究在生物进化、发育、遗传和变异中有十究在生物进化、发育、遗传和变异中有十分重要的作用。分重要的作用。核型分析均是以核型分析均是以中期染色体中期染色体为标准,对制为标准,对制作出的染色体标本进行照相以获得染色体作出的染色体标本进行照相以获得染色体的显微图像,并将其剪裁排列即成,或用的显微图像,并将其剪裁排列即成,或用专用软件进行分析排列。专用软件进行分析排列。凡处于活跃增殖状态的细胞,或者经过各凡处于活跃增殖状态的细胞,或者经过各种处理后,细胞就可进入分裂期此时均可种处理后,细胞就可进入分裂期此时均可用于染色体分析。用于染色体分析。在正常动物体内,骨髓是处于不断分裂的在正常动物体内,骨髓是处于不断分裂的组织之一。此时给动物注射一定剂量的组织之一。此时给动物注射一定剂量的秋秋水仙素水仙素可使许多处于分裂的细胞停滞于中可使许多处于分裂的细胞停滞于中期( 期( 秋水仙素可阻断纺锤丝微管的组装), 秋水仙素可阻断纺锤丝微管的组装), 然后采用常规空气干燥法制备染色体,即然后采用常规空气干燥法制备染色体,即可得到大量可供分析的染色体标本。本方可得到大量可供分析的染色体标本。本方法简便、可靠,不需要经体外培养和无菌法简便、可靠,不需要经体外培养和无菌操作。操作。实验材料: 实验材料: ??实验器材:离心管、低速离心机、吸管、实验器材:离心管、低速离心机、吸管、牙签、剪刀、载玻片、显微镜等。牙签、剪刀、载玻片、显微镜等。??实验试剂: 实验试剂: 100 100 μ μ g/ml g/ml 秋水仙素、秋水仙素、 KCl KCl 、、 Carnoy Carnoy 固定液、固定液、 Giemsa Giemsa 染液、染液、 磷酸缓冲液、磷酸缓冲液、 % % NaCl NaCl 生理盐水、生理盐水、 % % KCl KCl (低渗液)等。(低渗液)等。??小鼠腿一只小鼠腿一只实验步骤: 实验步骤: 1 1. .秋水仙素注射秋水仙素注射称出小白鼠的体重,然后按称出小白鼠的体重,然后按 2 2~ ~4 4μ μ g/g g/g 体重的剂量经腹腔体重的剂量经腹腔注射注射秋水仙素秋水仙素, ,3 3~ ~ 4h 4h 后颈椎脱臼法处死。后颈椎脱臼法处死。 2 2. .取出股骨取出股骨取出小鼠后肢的取出小鼠后肢的股骨股骨,剔除附着的肌肉,剪去股骨两端关,剔除附着的肌肉,剪去股骨两端关节。节。 3 3. .剪碎股骨于生理盐水剪碎股骨于生理盐水直接用手术剪将股骨剪碎于含有直接用手术剪将股骨剪碎于含有 5 ml % 5 ml % NaCl NaCl 的培养的培养皿中, 皿中, 反复剪碎,使反复剪碎,使骨髓细胞析出骨髓细胞析出,溶液成悬液状。,溶液成悬液状。 4 4. .收集细胞收集细胞用吸管反复用吸管反复吸打细胞吸打细胞,使细胞团块分散,转入两支,使细胞团块分散,转入两支 离离心管中。注意股骨碎片不要吸入离心管中。心管中。注意股骨碎片不要吸入离心管中。 3000 rpm 3000 rpm 离心离心 10 10 分钟收集细胞分钟收集细胞。。弃去上清弃去上清。(注意:可合并两支管内沉。(注意:可合并两支管内沉淀) 淀) 5 % % KCl KCl 溶液溶液 1ml 1ml , ,轻微吸放混匀轻微吸放混匀细胞,然后细胞,然后将离心管在室温下将离心管在室温下低渗低渗 20min 20min 。。 6 6. . Carnoy Carnoy 固定液预固定固定液预固定低渗结束后在离心管中加入低渗结束后在离心管中加入 Carnoy Carnoy 固定液进固定液进行行预固定预固定,用,用吸管轻微混匀吸管轻微混匀,可避免细胞结块, ,可避免细胞结块, 室温固定室温固定 5 5分钟后,混匀以分钟后,混匀以 2000 2000 rpm rpm 离心离心 10min 10min 。。 7 7. . Carnoy Carnoy 固定液重新固定固定液重新固定弃去上清液, 弃去上清液, 沿离