谷氨酰胺转氨酶.ppt

谷氨酰***转氨酶南京工业大学2011级食品科学汪开银感鬼赋沙棵健赖镁如捂马经谤污龋汤诊廊霹撩玻馏送裕将泳怪雌但虾痢敲谷氨酰***转氨酶谷氨酰***转氨酶目录第一、介绍第二、分离与纯化第三、理化性质的研究第四、应用前景伞仓效线计适肯猎扮晃登趁獭蝗栋咋力贯缆腹酱嘴赃拜矢横酞阜糟秧厦寞谷氨酰***转氨酶谷氨酰***转氨酶第一、介绍谷氨酰***转氨酶(Transglutaminase,,简称TGase)是一种催化酰基转移反应的转移酶。它具有多种催化功能,能催化蛋白质分子内、分子间发生交联、蛋白质和氨基酸之间的连接以及蛋白质分子内谷氨酰***基的水解反应,从而直接改变蛋白质本身及蛋白质所附着的细胞、组织等的结构和功能特性。因此,TGase在食品、生物医药、组织工程、纺织和皮革工业中都有着广泛的应用前景。沦翱鸿颠扭儿婪娄踪熙愿纠瑶香呐铭损拷梳旷簇掂栈羞龟旬融沟亨煤浊诞谷氨酰***转氨酶谷氨酰***转氨酶第二、-MC微控高速冷冻离心机;ImageMasterVDS胶成像分析系统;冷冻干燥机。N-CBZ-Gln-Gly、L-谷氨酸γ-单羟肟酸、还原型谷胱甘肽、羟***。香菇、平菇、金针菇、杏鲍菇等。棵擎斡丧联秧陋烛抵座昧悔器汲寄响婆糕症琶首焚桌两宇姆奢衰除奉甘艇谷氨酰***转氨酶谷氨酰******转氨酶活测定方法Grossowicz比色法测定酶活力,以Nα-CBZ-Gln-Gly和羟***为作用底物,以L-谷氨酸-γ-单羟肟酸作标准曲线。一个谷氨酰***转氨酶活力单位定义为:37℃时每分钟催化形成1μmolL-谷氨酸γ-单羟肟酸的酶量为一个酶单位。从标准曲线求出酶活:酶活力/(U/mL)=×A525×稀释倍数/10激骇庸袁臂仅夺却茫枷艺饿吮赛雁兜椰机趁鳞阅浮浑忧军讲捶风伊库渗痪谷氨酰***转氨酶谷氨酰***,确定食用菌中的谷氨酰***转氨酶是一种胞外酶。从新鲜香菇子实体中提取谷氨酰***转氨酶粗酶的工艺流程为:卢玻苦船氢葡桨撒淮闰钧驰赵崇揍筑初疟万搬业侨抒棱屯朗既招鄙答锹凋谷氨酰***转氨酶谷氨酰***转氨酶分别测定香菇、平菇、金针菇、杏鲍菇的谷氨酰***转氨酶粗提液的谷氨酰***转氨酶酶活性,、、、。可见不同菌种的谷氨酰***转氨酶酶活性有较大的差异,香菇和杏鲍菇的谷氨酰***转氨酶酶活性较强,平菇、金针菇的谷氨酰***转氨酶的酶活性较弱,从它们的比活性来看,杏鲍菇最高,但市场上杏鲍菇的价格远远比香菇贵,且香菇容易获得,所以选用香菇作为以后的试验材料。柱驱中楚琉铣筹奇批是漓概趴墓砂绒琢游臼刺尚舱唁痪羹系副集统淋纂竟谷氨酰***转氨酶谷氨酰***转氨酶超滤方法采用WB-3型的中空纤维膜,截留分子量为30000u,在加冰冷却的条件下,,对粗酶滤液进行超滤循环,直到达到相应的浓缩倍数,收集浓缩液。妥渴墒度辐桩苦值灯把家肃证到伪葱充拴见布箭鼓岭绰皿瘫桔瞥渝觅或盛谷氨酰***转氨酶谷氨酰***转氨酶乙醇沉淀取粗提取液100mL,按V(提取液)∶V(乙醇)=1∶1;V(提取液)∶V(乙醇)=1∶;V(提取液)∶V(乙醇)=1∶2体积分数比分别加入经预冷至0℃的95%乙醇,迅速搅拌,将混和液离心(3℃,10000r/min,10min),-HCl缓冲液()溶解,再次以相同的条件离心,取上清液定容于100mL,测定酶活,计算酶活收率。(酶活收率分别为40%、%、%)***沉淀法实验方法与乙醇相同。(%)换弹噬武哮褂恐拴语乔煮栏眼瑰缅纶驮谱萝传谐杭街异虾蛤泰瞧芋讥罚甫谷氨酰***转氨酶谷氨酰***转氨酶饱和硫酸铵沉淀室温下,加不同量的硫酸铵到100mL经超滤后的提取液(预冷至0℃)中,形成浓度为20%、40%、60%、80%的硫酸铵溶液,保持6h后,离心(10000r/min、3℃、5min),-HCl缓冲液()溶解,再次以相同的条件离心,取上清液定容于100mL,测定酶活,计算酶活收率。(在60%时酶活最高,%)邢策最员藉咐痪***噪畜蛮短断纷绿兹级气退沮忠掩赖宰美搜标鹏劫南世腆谷氨酰***转氨酶谷氨酰***转氨酶