细胞培养中的细节问题.ppt

基础篇-︰~,洗净后才开始使用。,以高压蒸汽灭菌,洗净后分别用一次与二次去离子水冲洗干净,勿加清洁剂清洗。︰,高压蒸汽灭菌121℃,20分钟,置于oven中烘干。℃,4小时。%hypochloride溶液(次***酸,即漂白水)或是蒸汽高压灭菌121℃,20分钟处理。床壤对稳嚎隧蚤进遵蜒晾嘲腮仆楚竟选卉槐鞠策沂郡茄碎戮各年呈谭缀礁细胞培养中的细节问题细胞培养中的细节问题基础篇-,培养基中不加抗生素。,制作tokenfreeze前培养基须添加抗生素,待tokenfreeze通过污染测试后,大量培养时则不加抗生素。,须将培养液充满整个flask时,则须添加抗生素(penicillin100units/ml+streptomycin100ug/ml)。,则培养基内不可添加gentamicin,因gentamicin会抑制mycoplasma生长。:penicillin250units/ml,streptomycin250ug/ml,neomycin250ug/ml,,注意混合使用后药物毒性会增强。:              penicillin100units/ml-20℃G(+)bacteriastreptomycin100ug/ml-20℃G(+)andG(-)bacteriachlotetracycline50ug/ml-20℃G(+)andG(-)bacteriagentamicin50ug/ml-20℃G(+)andG(-)bacteria,mycoplasma-20℃yeastandmoldsnystatin50ug/ml-20℃yeastandmolds-20℃yeastandmolds砚馏讹胚办敷槐骆藩妨拐杭釉渠氦狭搅辫蝗侯嵌这绎纱轻熄渠泛怜棕河傈细胞培养中的细节问题细胞培养中的细节问题基础篇-–20~-70℃,若存放于4℃,勿超过一个月。,不需再无菌过滤。若发现血清有许多悬浮物,可将血清加入培养基内一起过滤,勿直接过滤血清。(500ml)血清解冻步骤(逐步解冻法):-20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天,至室温下全溶后再分装,一般以50ml无菌离心管可分装40~45ml。在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沈淀的发生。勿直接由–20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沈淀。-inactivation是指56℃,30分钟加热已完全解冻之血清。加热过程中须规则摇晃均匀。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须,一般不建议作此热处理,因为会造成沉淀物之显著增多,且会影响血清之品质。℃太久,若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定之成份亦会因此受到破坏,而影响血清之品质。:发生之原因有许多种,但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein)变性及解冻后血清中存在之血纤维蛋白(fibrin)造成,这些凝絮沉淀物不会影响血清本身之品质。“小黑点”:通常经过热处理之血清,沉淀物的形成会显著的增多。有些沉淀物在显微镜下观察像是“小黑点”,常会误认为血清遭受污染,而将血清放在37℃中欲培养此“微生物“,但在37℃环境下,又会使此沉淀物增多,更会误认为微生物之增殖,但以培养细菌之培养基检测,又没有污染。逼魄弛碍连饺臣匿瞧汁靡差锌孰庞淹福篇掌孪溪喷娘坝隋应童逞芥乳沾囚细胞培养中的细节问题细胞培养中的细节问题基础篇-,即须分殖至新的培养瓶中,一般稀释比例为1:3至1:6,依细胞种类