致病性菌检测方法-国家标准.doc

大肠杆菌检测方法一、检测流程图稀释液(1:10)10ml10ml双倍乳糖胆盐培养基44±℃24-48h不产酸不产气产酸产气划线伊红美蓝1-2滴到蛋白胨水37℃18-24h44±℃24h*:玫瑰红色阴性:试剂本色阴性短杆菌非阴性短杆菌粪大肠杆菌注:(1)代表非粪大肠杆菌,没必要在进行下一步鉴定。(2)典型菌落:深紫黑色,圆形,边缘整齐,表面光滑湿润,具有金属光泽。也有呈紫黑色,不带或略带金属光泽,或粉紫色,中心较深的菌落。二、(货号:022041,厂家:广东环凯微生物科技有限公司)称取60g到1L蒸馏水或去离子水,加热搅拌完全溶解,分装到带有小倒管的试管,115℃高压灭菌20min。(货号:022060,厂家:广东环凯微生物科技有限公司),加入蒸馏水或去离子水1L,121℃高压灭菌15min。(货号:022110,厂家:广东环凯微生物科技有限公司)称取25g到1L蒸馏水或去离子水,加热搅拌完全溶解,分装到试管,121℃高压灭菌15min。:5g对二甲氨基苯甲醛溶于75ml戊醇,缓慢加入浓盐酸25ml。)染液制备结晶紫染色液,革兰氏碘液,脱色液(95%乙醇),复染液(沙黄复染液/稀石碳酸复红液)2)染色法A将涂片在火焰上固定,滴加结晶紫染色液,染1min,水洗。B滴加革兰氏碘液,作用1min,水洗。C滴加95%乙醇脱色,约30s,或将乙醇滴满整个涂片,立即倾去,再用乙醇滴满整个涂片,脱色10s,水洗。D滴加复染液,复燃1min,水洗,待干,镜检。3)染色结果革兰氏阳性呈紫色,革兰氏阴性呈红色。铜绿假单胞杆菌检测方法检测流程图薄菌膜,培养液黄绿色或蓝绿色无薄菌膜,培养液非黄绿色或蓝绿色*典型菌落无典型菌落90mlSCDLP(*增菌培养)37℃,18-24h革兰氏染色*氧化酶试验*绿脓菌素试验****盐还原产气试验*明胶液化试验*42℃生长试验阳性:粉红色/紫红色阴性:凝固不溶阳性阴性阴性阴性阳性:粉红色/紫红色阴性:无气阳性:产气阳性:粉红色/紫红色阴性:不生长阳性:生长稀释液(1:10)10ml十六烷基三***溴化铵培养基37℃,18-24h注:(1)代表非铜绿假单胞杆菌,没必要在进行下一步鉴定。(2)典型菌落:扁平无定形,向周边扩散或略有蔓延,表面湿润,菌落呈灰白色,菌落周围培养基常扩散有水溶性色素。(3)氧化酶试验:取一小块洁净的白色滤纸片放在平皿内,用无菌玻璃棒挑取可疑菌落涂在滤纸上。滴加一滴新配制的1%二***对苯二***试剂,在15s-30s之内出现粉红色或紫红色为阳性,阴性不变色。(4)绿脓菌素试验:取可疑菌落2-3个,分别接种在绿脓菌素测定培养基上,置37℃培养24h,加入***仿3-5ml,充分振荡是培养物中的绿脓菌素溶解于***仿内,待提取液为蓝色时,将其转移到试管并加入1mol/L盐酸1ml,振荡,静置。上层盐酸出现粉红色到紫红色为阳性。(5)***盐还原产气试验:取可疑菌落,接种***盐蛋白胨水培养基,37℃培养24h。小倒管有气体为阳性。(6)明胶液化试验:取可疑菌落,穿刺接种在明胶培养基,37℃培养24h后,放冰箱10-30min,阳性呈溶解状,阴性为凝固不溶。(7)4