液相色谱法测定生物制品中甲醛的含量.doc

液相色谱法测定生物制品中甲醛的含量目前,甲醛作为一种防腐剂,广泛应用在菌疫苗类生物制品生产工艺中,以防止微生物的污染。游离甲醛含量的检测是生物制品检定的重要指标,游离甲醛含量的高低关系到制品的质量及人民的生命健康及安全性[1]。测定生物制品甲醛含量的方法主要采用分光光度法[2],本实验探讨了样品反应环境、2,4-二硝基苯肼衍生体系、色谱条件等。反应产物甲醛衍生物不需要有机溶剂萃取[3],在样品本身pH下即弱酸性条件下可直接用于液相色谱分析,避免萃取过程的损失[4]和调节酸碱度的繁琐。而且生物制品中实际存在的游离甲醛含量为痕量,利用萃取法不实际。在检出限及精确度方面更是优越于分光光度法。目前,甲醛作为一种防腐剂,广泛应用在菌疫苗类生物制品生产工艺中,以防止微生物的污染。游离甲醛含量的检测是生物制品检定的重要指标,游离甲醛含量的高低关系到制品的质量及人民的生命健康及安全性[1]。测定生物制品甲醛含量的方法主要采用分光光度法[2],本实验探讨了样品反应环境、2,4-二硝基苯肼衍生体系、色谱条件等。反应产物甲醛衍生物不需要有机溶剂萃取[3],在样品本身pH下即弱酸性条件下可直接用于液相色谱分析,避免萃取过程的损失[4]和调节酸碱度的繁琐。而且生物制品中实际存在的游离甲醛含量为痕量,利用萃取法不实际。在检出限及精确度方面更是优越于分光光度法。;2、4-二硝基苯肼(分析纯);乙睛(色谱纯);甲醛(分析纯);冰醋酸(分析纯);氢氧化钠(分析纯)。:UltimateXB-C18柱(×250mm,-31043,SerialNumber211302350),流动相:乙睛:水=60:40(体积比),检测波长:360nm进样量:10uL。、4-二硝基苯肼乙睛溶液():称取2、4-二硝基苯肼300mg,用乙睛定容至100mL。缓冲溶液():,并用水定容至500mL。%-38%,用水稀释至1L,碘量法标定甲醛浓度,用缓冲液将甲醛标准溶液稀释至100ug/mL。临用时分别取100ug/mL甲醛标准溶液1、2、3、4、5mL,用缓冲液定容至50mL,使其分别为2、4、6、8、10ug/mL甲醛标准缓冲溶液,待用。,重组乙型肝炎疫苗适量,3000r/min离心10min,准确移取上清液3mL于10mL比色管中,,4-二硝基苯肼乙睛溶液,,塞紧塞子,于60℃水浴20min,冷却至室温。。,4-二硝基苯(甲醛)标准溶液在紫外分光光度计上扫描,结果表明2,4-二硝基苯腙在360nm处有较强吸收。-水和乙***-水两种流动相体系,后者优于前者。由于甲醇中含有微量甲醛,本方法选用乙***。改变流动相中乙***比例,对甲醛苯腙的峰面积影响不大,对保留值影响较大,随着流动相中乙***浓度增加,甲醛苯腙的保留时