血小板计数的参考方法.doc

--------------------------校验:_____________-----------------------日期:_____________血小板计数的参考方法WS中华人民共和国卫生行业标准WS/T244—2005___________________________________________________血小板计数的参考方法Referencemethodforplateletcounting2005-5-16发布2005-12-1实施___________________________________________________________中华人民共和国卫生部发布WS/T244-2005前言为了保证血小板的计数结果具有溯源性和准确性,特制定本标准。本标准从2005年5月16日起实施。本标准由卫生部医政司提出。本标准起草单位:卫生部临床检验中心本标准主要起草人:彭明婷、申子瑜、陆红、谷小林、杨振华。本标准由卫生部委托卫生部临床检验中心负责解释。中华人民共和国卫生行业标准血小板计数的参考方法WS/T244—2005Referencemethodforplateletcounting_____________________________________________________________________1范围本标准规定了血小板计数参考方法的技术要求。本标准适用于建立血小板计数参考方法的实验室。2规范性引用文件国际血液学标准化委员会(ICSH)-2001血小板计数的参考方法3定义参考方法(Referencemethod)一种可清楚和准确描述的用于特定检测的技术,该技术要有依据,可提供足够准确和精密的实验数据以评价其他实验方法检测结果的有效性。若有决定性方法,参考方法的准确性必须与决定性方法进行比较。参考方法应溯源至一级计量标准并且须标示不准确度和不精密度。(Platelet,PLT)。即用荧光标记PLT后,用流式细胞仪检测红细胞(Redbloodcell,RBC)和PLT的比值,同时用单通道阻抗原理的半自动细胞计数仪准确计数RBC,用RBC除以RBC和PLT的比值得出PLT的计数值。,建立参考方法的实验室必须进行比对。5血小板计数参考方法的原理首先将EDTA抗凝血标本用无菌缓冲液进行预稀释,再用特定的荧光抗体对PLT进行染色。溶液中已染色的血小板被稀释成计数浓度,用流式细胞仪检测血小板和红细胞,根据荧光强度和散射光强度将阈值设在可从RBC中区分PLT的位置,以检测出RBC和PLT的比值。用RBC的计数值除以RBC/PLT的比值计算出PLT计数值。。,(~)。。。℃~22℃室温条件下,取血后4小时之内完成检测。,在预稀释和加标记抗体前动作轻柔地将采血管反复颠倒,充分混匀标本。勿使用混匀器对标本进行混匀。7容器和器皿为避免血小板黏附于储存容器或稀释器皿上,在标本检测的整个过程中必须使用聚丙烯或聚苯乙烯容器,不得使用玻璃容器和器皿。,通过前向角散射光和荧光强度来检测PLT和RBC。仪器在检测异硫***酸荧光素标记的直径为2μm的球形颗粒时必须有足够的敏感度。、单通道、阻抗原理的细胞计数仪检测RBC,仪器小孔管的直径为80~100μm,小孔的长度为直径的70%至100%,计数过程中吸入稀释标本体积的准确度在1%以内(溯源至国家或国际计量标准)。:用磷酸盐缓冲液(PBS)作为稀释液,,~,%的牛血清白蛋白(BSA),配制方法如下:(Na2HPO4;化学分析纯,;)加到约750ml去离子水或蒸馏水中并使之溶解。(KH2PO4;化学分析纯,),***化钠(NaCl;化学分析纯,),200mg***化钾(KCl;化学分析纯,)。保存于4℃~8℃条件下。~。:使用异硫***酸荧光素标记的CD41和CD61抗体