实验七 细菌生化反应.pptx

实验七细菌生化反应一、实验目的1、了解细菌生理生化反应原理,掌握细菌鉴定中常用的生理生化反应的测定方法;2、掌握糖发酵试验、硫化氢试验、吲哚实验、MR及VP、KIA原理、方法及结果判断。3、了解细菌在培养基中的生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义;4、掌握以上实验的用途。二、实验原理不同细菌具有不同的酶系统,故不同细菌分解、利用糖类、脂肪类和蛋白类物质的能力不同,它们对物质的代谢谱和分解产物也就不同,细菌的这种代谢特点可供鉴别细菌之用。用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物,从而鉴别细菌的种属,称之为细菌的生理生化反应,其在菌株的分类鉴定中具有主要意义。不同细菌,不同的酶不同的底物不同的产物三、实验器材1、实验仪器:37℃恒温培养箱。2、微生物材料:大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的菌种平板各1个。3、试剂:VP试剂、***红试剂、吲哚试剂、3%双氧水。4、用具:接种针、记号笔、酒精灯、镊子、试管和试管架等5、培养基葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基(葡萄糖和甘露醇)和双糖铁培养基。细菌微量生化管使用说明从包装盒中取出微量生化鉴定管。临用时,用砂轮在生化管上端无试剂处划一圈,然后用力折断生化管,插入试验架或泡沫块中。如果染菌或变色,则不能使用,重新拿一支。接种后置培养箱培养24h。四、操作步骤1、糖发酵实验不同的细菌含有发酵不同糖(醇)的酶,因而发酵糖(醇)的能力各不相同。其产生的代谢产物亦不相同,如有的产酸产气,有的产酸不产气。酸的产生可利用指示剂来判定。指示剂:溴甲酚紫(~,pH<,pH>)培养基:当发酵产酸时,可使培养基由紫色变为黄色。气体产生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。发酵后产生的有机酸:乳酸、醋酸、丙酸等发酵后产生的气体:甲烷、氢、二氧化碳等(杜氏小管内有气泡,产气漂浮)。生化反应管:葡萄糖、甘露醇①试管标记:取分别装有不同糖类(如葡萄糖、甘露醇等)微量生化管,根据需要培养的细菌做好标记(如大肠埃希菌等和空白对照)。②接种培养:以接种针挑少量菌苔至以上各相应试管中,空白对照中不接种,置37℃恒温箱中培养,培养24h观察结果。③观察记录:培养后各发酵管与空白对照相比,观察颜色变化。培养液不变颜色,示细菌不能利用该种糖,阴性:“-”表示。培养液变颜色,示细菌能分解该种糖产酸,阳性,“+”表示。如产气,表明该菌分解糖能产酸并产气,记录用+2、MR实验细菌分解葡萄糖产生***酸,***酸继续分解,产生甲酸、乙酸、乳酸等,。而某些细菌如产气杆菌,分解葡萄糖产生***酸,但很快将***酸脱羧,转化成醇等,。指示剂:***红变色范围:(红色)——(黄色)。生化反应管:葡萄糖蛋白胨水①试管标记:根据需要培养的细菌做好标记。②接种培养:以接种针挑少量菌苔至以上各相应试管中,空白对照中不接种,置37℃恒温箱中培养,培养24h~48h。③沿管壁加入***红试剂2-3滴,混匀后观察结果。④观察记录:仔细观察培养液上层培养液上层变成红色,即为阳性反应;“+”若仍呈黄色,则为阴性反应,“-”