灭菌是指用物理或化学的方法.doc

灭菌是指用物理或化学的方法,杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体,即把所有生命的物质全部杀死。消毒,它指杀死、消除或充分抑制部分微生物,使之不再发生危害作用,显然经过消毒,许多细菌芽孢、霉菌的厚垣孢子等不会完全杀死,即消毒后的环境里、物品上还有活着的微生物。而通过严格灭菌的操作空间(接种室、超净台、等)和使用的器皿,以及操作者的衣着和手都不带任何活着的微生物。在这样的条件下进行操作,就叫做无菌操作。常用的灭菌方法可分为物理的和化学的两类。物理方法如干热(烘烧和灼烧)、湿热(常压或高压蒸煮)、射线处理(超声波、微波)、过滤、清洗和大量无菌水冲洗等措施。化学方法是使用升***、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏儿、漂白粉、次***酸钠、抗菌素、酒精化学药品处理。,把镊子、剪子、解剖刀等浸入95%的酒精中,使用之前取出在酒精灯火焰上灼烧灭菌。冷却后,立即使用。操作中可采用250或500ml的广口瓶,放入95%的酒精,以便插入工具。~180℃的温度来杀死微生物。通常采用170℃持续90分钟来灭菌。,如赤霉素、玉米素、脱落酸和某些维生素是不耐热的,不能用高压灭菌处理,通常采用过滤灭菌方法-防细菌滤膜。(1)紫外线灭菌在接种室、超净台上或接种箱里用紫外灯灭菌。紫外线灭菌是利用辐射因子灭菌。细菌吸收紫外线后,蛋白质和核酸发生结构变化,引起细菌的染色体变异,造成死亡。紫外线的波长为200~300nm,其中以260nm的杀菌能力最强,但是紫外线的穿透物质的能力很弱,所以只适于空气和物体表面的灭菌,。(2)熏蒸灭菌用加热焚烧、氧化等方法,使化学药剂变为气体状态扩散到空气中,以杀死空气和物体表面的微生物。这种方法简便,只需要把消毒的空间关闭紧密即可。升***与高锰酸钾,常用熏蒸剂是甲醛。物体表面可用一些药剂涂擦、喷雾灭菌。如桌面、墙面、双手表面、植物材料表面等。可用70%的酒精反复涂擦灭菌,1%~2%~1%的新洁尔灭也可以。:外植体部位:不同植物以及同一植物的不同器官对诱导条件的反应不一样;取材季节:大多数植物应该在生长开始的时候采集;器官的生理状态和发育年龄:幼年组织比老年组织具有较高的形态发生能力;外植体大小:茎尖培养中,外植体越小成活率越低。外植体的灭菌方法:植物材料必须经严格的表面灭菌处理,再经无菌操作手续接到培养基上,这一过程叫做接种。接种的植物材料叫做外植体。首先,将采来的植物材料除去不用的部分,将需要的部分仔细洗干净,如用适当的刷子等刷洗,硬的材料用刮刀刮。第二步是对材料的表面浸润灭菌。第三步是用灭菌剂处理。最后一步是用无菌水涮洗,涮洗要每次3分钟左右,视采用的消毒液种类,涮洗3~10次左右。接种是将已消毒好的根、茎、叶等离体器官,经切割或剪裁成小段或小块,放入培养基的过程。接种前后的程序:A:接种室消毒:用酒精擦拭台面,接种工具摆放好后用紫外灯照射表面灭菌15-20分钟,然后通风20分钟;B:手要洗净,用75%酒精擦手,在操作过程中要经常用酒精擦手;C:将初步洗涤及切割的材料放入烧杯(烧杯用7