总大肠菌群检验.ppt

;;。大肠菌群检验教学目标(1)知识目标大肠菌群的性状特征;多管发酵法检验原理;检验各环节的特征性表现。(2)技能目标掌握大肠菌群检验的总体程序;掌握乳糖发酵检验的操作技能;掌握伊红美蓝平板检验的操作技能;掌握检验结果报告的方法。(3)素质态度要求态度端正,积极主动学****严守操作规范,团结协作。大肠菌群检验一、大肠菌群检验原理与程序大肠菌群是水体粪便污染的指示菌。天然水体的细菌性污染主要源于生活污水中的粪便,其中可能病原菌种类很多,而大肠菌群是数量最大的,可以用作水体粪便污染状况的指示菌。大肠菌群的类别特征:37℃24~48h能利用乳糖产酸产气,好氧和兼性厌氧,G-,无芽胞。能在伊红美蓝培养基上产生特征性菌落:有核心,带金属光泽,深紫色;深黑色、不带或略带金属光泽;淡紫红色、中心较深。大肠菌群检验检验程序: 乳糖发酵检验伊红美蓝平板分离检验革兰氏染色准备工作:(1)制备培养基乳糖蛋白胨培养液: 成分:蛋白胨10g、牛肉膏3g、乳糖5g、***化钠5g、水1000ml,溴甲酚紫乙醇液(16g/L)1ml。制法:~,分装于装有倒管的试管中(每管10ml)。115℃20min。二倍浓缩乳糖蛋白胨培养液:除水外加倍。大肠菌群检验伊红美蓝培养基: 成分:蛋白胨10g、磷酸氢二钾2g、琼脂20g、水1000ml,乳糖10g;伊红水溶液(20g/L)20ml、美蓝水溶液(5g/L)13ml。制法:,115℃20min。倒平板前加入伊红美蓝。制备无菌生理盐水。(2)培养皿、试管、移液管等玻璃器皿的灭菌;大肠菌群检验生活饮用水——原始水样,接种10ml到双料液中(或加1个10倍无菌生理盐水稀释液,接种1ml到单料液中)。出厂自来水——原始水样接种10ml到双料液中,1ml10倍无菌生理盐水稀释液接种到单料液中。水源水——10倍无菌生理盐水递交稀释到10-3,3浓度各1ml接种到单料液中;污染严重可加大稀释度。每个样品接种均为5重复。二、乳糖发酵检验大肠菌群检验36℃培养24h。产酸(变黄色)产气者报告为乳糖检验阳性,进入下一步检测。二、乳糖发酵检验大肠菌群检验取发酵液接种到伊红美蓝培养基平板(划线分离),36℃培养24h。具备下列大肠菌群典型菌落特征的为阳性管: 有核心,带金属光泽,深紫色; 深黑色、不带或略带金属光泽; 淡紫红色、中心较深。三、伊红美蓝平板分离检验