浙大生化实验报告氨基转换反应.doc

专业:生环姓名:学号:日期::装订线实验报告课程名称:生化实验甲指导老师:成绩:__________________实验名称:氨基移换反应及其产物的鉴定实验类型:同组学生姓名:一、实验目的和要求(必填) 二、实验内容和原理(必填)三、实验材料与试剂(必填)四、实验器材与仪器(必填) 五、操作方法和实验步骤(必填)六、实验数据记录和处理七、实验结果与分析(必填)八、讨论、心得一、实验目的和要求1、学****鉴定氨基移换反应的简便方法及其原理;2、学****纸层析的原理和操作技术。二、:在氨基移换酶(转氨酶)的催化下,氨基酸的α-氨基和α-***酸的α-***基之间发生的互换反应。转氨酶的种类很多,任何一种氨基酸进行转氨作用时都由其专一的转氨酶催化。,在各种转氨酶中,谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)的活性最强。转氨酶广泛存在于机体的各种组织中。在肝、心、肾等组织中谷丙转氨酶(glutamicpyruvictransaminase,GPT)、谷草转氨酶(glutamicoxalacetictransaminase,GOT)活性较高。GPT催化下的转氨基反应为:L-谷氨酸脱氢酶在体内特别是在肝细胞内含量丰富,活性高,催化L-谷氨酸氧化脱-NH2,加碘乙酸能抑制其活性,从而可以保护氨基移换反应的产物L-谷氨酸。本实验用纸层析法,检查由丙氨酸和α—***戊二酸在肝细胞谷丙转氨酶(GPT)的作用下所生成的谷氨酸,证明组织内的氨基移换作用。:滤纸层析是以滤纸作为惰性支持物的分配层析。利用不同物质在两个互不相溶的溶剂中分配情况(溶解度)的不同来分离混合物的一种技术。层析溶剂是由有机溶剂和水组成。滤纸纤维上羟基具有亲水性,因此吸附一层水作为固定相,而通常把有机溶剂作为流动相。进行分离时,由于被分离物质的组分在两相中的分布不同,随着流动相的移动,物质将在两相间进行连续的、动态的不断分配,从而造成不同组分移动的速度也不相同。易溶于流动相中的组分移动快,在固定相中溶解度大的组分移动慢,于是得到分离。用滤纸层析法分离氨基酸,是根据氨基酸样品的R基团的化学结构或极性大小的不同,将样品氨基酸溶解在适当的溶剂()中,点样在滤纸的一端,再选用适当的溶剂系统(酚溶液),通过毛细现象向另一端展层,展层完毕后,用茚三***作为显色剂,即可得到氨基酸样品的分离图谱。***的显色原理:氨基酸+茚三***类紫红色复合物三、实验材料与试剂1、实验材料动物肝脏(牛蛙肝或猪肝)2、实验试剂⑴()(转氨基反应所需缓冲溶液);⑵-丙氨酸()(转氨基反应的底物,纸层析的标准样品);⑶-***戊二酸()(转氨基反应的底物);⑷()(纸层析的标准样品);⑸展层溶剂-酚溶液:水饱和酚:冰乙酸(300:1)(纸层析用);⑹10%三***乙酸(终止酶促反应,使转氨酶及其它蛋白质变性、沉淀);⑺%碘乙酸(抑制L-谷氨酸脱氢酶活性);⑻显色剂(%茚三***-乙醇溶液)。四、实验器材与仪器⑴研钵;⑵试管及试管架;⑶恒温水浴箱(37℃、100℃);⑷铅笔、尺和圆规;⑸毛细管()