RANKL对成人骨髓间质干细胞向神经细胞分化的影响研究.pdf

河北医科大学
博士学位论文
RANKL对***骨髓间质干细胞向神经细胞分化的影响研究
姓名:赵宗茂
申请学位级别:博士
专业:外科学
指导教师:张庆俊

猿扇斯撬杓渲矢上赴蛏窬赴只挠跋煅芯要长期以来,人们一直认为人和成年哺乳动物中枢神经系统不存在神经干细胞琋,脑和脊髓中神经元一旦死亡,将不能再生。直到年,等首先报道从成年哺乳动物纹状体中培养出多潜能神经干细胞,彻底打破了这一传统观念。近年来,胚胎和神经干细胞移植在治疗多种神经系统变性疾病中获得成功,开始广泛用于神经再生、修复和功能重建研究。但因受来源和道德、伦理方面的限制,人不易获得:目前建立的系又绝大多数来源于鼠类,与人存在显而易见的种属差异。因此,人们正在积极寻求一种更为理想的、可替代的干细胞来源。大量研究证实骨髓间质干细胞具有多种分化潜能,在适当条件下可分化为成骨细胞、软骨细胞、肌肉细胞、脂肪细胞、心肌细胞、血管内皮细胞、肝细胞、韧带、真皮甚至神经细胞。最近有人采用脑源性神经营养因子.,蜕窬ひ蜃,等成功地将逋庥盏挤只I窬:蜕窬褐细胞,但向神经元分化的比率很小。因此,如何提高蛏窬元的定向分化率成为近年来神经科学领域的研究热点。核转录因子涮迨芴寮ざ蜃是近年来发现的一个新韵细胞因子,可诱导神经元的两种单***类神经递质的受体组***素能儿茶酚***受体產表达上调,⒒又匾W饔茫但贐向神经细胞分化中的作用迄今为止国内外未见报道。为此,我们进行了猿扇斯撬杓渲矢上赴琱向神经细胞分化的影响研究。研究包括以下四部分:体外诱导向神经细胞定向分化的研究;浦捕源笫蠹顾杷鹕松窬δ芑指中文摘要摘琀蜕錾舷,..
疫细胞化学方法检测培养细胞的神经元标志一神经元特异性烯醇化酶琋蜕窬褐氏赴曛疽唤褐氏宋嵝的影响;在大鼠脊髓损伤后移植中的作用;诖笫缶衷钚阅匀毖:骽浦仓械淖饔醚芯俊Mü内外神经细胞分化结果对比,探讨詇窬赴只的影响,为蚳谏窬蒲Я煊虻挠τ锰峁├砺垡甊体外诱导***骨髓间质干细胞分化为神经细胞的研究本研究目的在于研究逋庥盏糷只I窬:神经胶质细胞的可行性,探讨趆蛏窬赴只无菌条件下,取因胸外科手术入路需要摘取的正常***肋骨,从骨髓中分离单个核细胞,接种于塑料培养瓶中,℃嘌渲培养。待贴壁细胞生长铺满瓶底后,消化传代,获得第一代。我们采用第二代进行诱导分化,按细胞/密度接种于培养板中,培养基换为含胰岛素、转铁蛋白、黄体***、全反式视黄酸的培养基,是为对照组。组、楹组分别在此培养基中加入/。倒置显微镜动态观察细胞生长情况,细胞诱导分化前和诱导分化后、珿的表达情况。***骨髓单个核细胞最初接种到培养瓶中时绝大部分为圆形或类圆形的球体样细胞:螅糠窒赴J继冢仕笮纬上宋胞样或上皮细胞样生长;蟛糠窒赴侍谏ぃ赴喑仕笮或扁平形;原代培养第~螅赴ぢ嘌康祝灞涞孟长,形态类似成纤维细胞。第二代诱导分化螅琑榭杉霰鹣胞形态发生变化,原来宽大扁平的细胞胞质变窄、向核收缩,其余组未见类似改变。保髯榫胁煌康南赴斐龀ね黄穑胞核体积缩小,细胞呈纺锤形或梭形,以组最多,个别细胞己分化为胞体呈锥形并伸出多个长突起的神经样细胞:中文摘要据。的作用。/和τ妹蛋白/、/畇
豺騅组、组组、橐来未沃哉兆楹苌伲胞逐渐增多,尤以组最为明显,胞体呈锥形,突起交对照组开始出现粜韵赴涫咳丛侗绕渌髯樯.,,在体外哂卸ㄏ蛴盏糷蛏窬的作用不及;虰嫌镁哂行饔茫商岣呦撬杓渲矢上赴浦捕源笫蠹顾杷鹕松窬δ芑指吹挠跋和神经胶质细胞。本研究目的是采用大鼠脊髓半切模型进行移植,评价移植后的蛏窬:蜕窬褐氏赴只榭觯别是分化的神经元和神经胶质细胞是否具有神经修复、迁移功能,为移植治疗脊髓损伤提供理论依据。健康大鼠只,雌雄不限。其中只行脊髓左侧半横切只。另外只为假手术组,仅咬除棘突和椎板。组和保髯槎嗤黄鹕窬织成网状,同时各组均伴有不同程度的细胞死亡导致细胞总数下降。盧樵ヒ陨系拇婊钕赴湫挝5湫偷纳窬细胞;而组、楹投哉兆榈纳窬赴直鹪颊即婊细胞的%、%和%。细胞诱导分化前及诱导分化后和榫醇絅、阳性细胞;诱导分化后陨三组均可见到少量粜韵赴ǘ哉兆樵蛭捶⑾、阳性细胞数也不尽相同。组粜韵赴飨愿哂贐楹蚏组.,其阳性细胞数也显著高于镹阳性细胞数和组无显著性差异,但阳性细胞数却显著低于组.。组粜韵赴疃啵赴黄鹱罘岣唬阂次为组、楹投哉兆椤方向分化作用,与相当,但诱导向神经胶质细胞分化神经元定向分化的比率。我们在前一部分已经证实在体外经诱导可分化为神经元后随机分为组只、弧⒌ゴ考顾璋肭凶中文摘要
移和神经元标志一神经元特异性核蛋白经胶质细胞标志一胶质纤维酸性蛋白组又各分为三个亚组:头端注射亚组、尾端注射亚组和头尾两端注射亚组垦亲。在手术显微镜下按ㄖ谱鱐顾璋切模型,于脊髓半切头端、尾端或头尾两端损伤临近区灰白质交界处各