体外诱导人骨髓间充质干细胞亚群—CD45'-HLA-DR'-细胞向肝细胞样细胞分化的研究.pdf

郑州大学
硕士学位论文
体外诱导人骨髓间充质干细胞亚群—CD45<'->HLA-DR<'->细胞
向肝细胞样细胞分化的研究
姓名:王晓
申请学位级别:硕士
专业:消化内科
指导教师:段芳龄
20030511
体外诱导人骨髓间充质干细胞亚群一一狣细胞向肝细胞样细胞分化的研究段芳龄要研究生郑州大学消化疾病研究所摘王晓导师河南郑州背景与目的原位肝移植是现行治疗急性肝功能衰竭、终末期肝病和代谢性肝病最为有效的方法。但是由于供体的缺乏,许多病人在等待肝移植时死亡。同时长期免疫抑制剂的使用也大大限制了原位肝移植的推广和应用。人工肝经多年的研究,已开始用于临床,对改善终末期肝病患者症状、延长生命有一定作用。针对非生物型人工能衰竭有效的支持治疗手段和肝移植必要的辅助治疗措施,在前期临床研究中已取得了较好的效果,但是仍然存在许多问题。其中,作为生物人工肝核心部分的肝细胞来源依然是一个重要的课题。骨髓中有两类干细胞,一类是造血干细胞的共性,也是一种具有多向分化潜能的细胞,在一定条件下能够分化为多种造血外组织细胞,如成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、成肌细胞和神经细胞及神经胶质细胞等。成体骨髓是异质的,因为它们在形态上包括三种细胞类型,即纺锤状细胞、体积大呈扁平状的细胞和体积极小的小圆细胞。这些小圆细胞是的一个亚群,在培养过程中是最早出现的祖细胞,具有极强的向多系分化的潜能。体外能够刺激基质细胞生长,诱导基质细胞分化;在体内作为一种信号分子,在胚胎发育过程中对基质细胞的分化起着非常重要的作用。肝细胞生长因子肝无法替代肝脏的合成及生物转化功能等问题,年岢隽松锶斯,母拍睢I锶斯じ巫魑8喂另一类是间充质于细胞琈。骨髓具有干细胞成纤维细胞生长因子一一現一是一多肽,在肝琀,郑州大学年硕士研究生毕业论文体外诱导人骨髓间充喷干细胞亚群—Ⅲ幌断赴蚋蜗赴赴只难芯
郑州大学年硕士研究生毕业论文体外诱导人骨髓间充质干细胞亚群砌砸籇赴蚋蜗赴赴只难芯如果在体外能够诱导人骨髓间充质干细胞的亚群——一狣细胞向肝细方法烈鹊核匾蛔L匾晃旌衔普通型×一晰氢化可的松,羖徊匣,是一潜在的肝细胞丝裂原,受体是狹蛋白,在肝脏的生长和再生过程中起重要作用。体外隿—黄鹂傻鹘诟卧嗟男纬桑体内二者的结合对胚胎及胎儿期肝脏的生长发育起着至关重要的作用。胞样细胞分化成功,那么其临床应用前景非常广阔。首先,可推动生物人工肝和肝细胞移植的临床应用,治疗各种急、慢性肝功能衰竭和肝脏代谢性疾病,为临床上研究提供大量高质量的肝细胞,从而推动新药的研制和开发;第三,骨髓取材方便,对机体无害,可取自体骨髓,因此由它诱导而来的组织细胞在进行移植时不存在组织配型及免疫排斥的问题,更易被患者接受和临床应用。本研究的目的是观察一约岸吡S枚耘嘌墓撬璧ジ龊讼赴珺轈和稩赴淖饔茫罢矣跋旌偷节甆、一狣细胞向肝细胞样细胞定向分化的最佳条件,探讨体外诱导培养获取具有表型、功能和结构特征的肝细胞样细胞的可能性,从而为现代细胞工程学提供细胞来源。收集无血液疾患的甑娜说墓撬璧ジ龊讼赴珺,用生长液低糖型琁,/青霉素,痬疵顾豜进行培养,接种密度为甇×痬4赴ご锒允て冢么式细胞分离仪分选出’细胞,改用维持液低糖型%琹痬嗝顾豜培养,并开始进行分组诱导。具体分组如下:⒍哉兆:维持液⑽忠删/⑽忠軨痬⑽忠一各/⒍哉兆:维持液狣细胞⑽忠Ⅶ,狣赴/终末期肝病的治疗带来希望:其次,通过干细胞工程技术,为毒理学和药代动力学痬怯退幔痬⑽忠—赴卜/乙醇,痬.
、天留取细胞,进行透射电镜检测、制备细胞涂片进行免疫细胞化学、合成糖结果六组产生尿素氮也逐渐增多,在,天时,出现糖原染色阳性,而两结论瓾和/或能够诱导人骨髓—一细胞向具有肝细胞结构特征的⑽忠一狣赴痬以上各组细胞接种密度均为×痬尤氲皆て逃邢宋铀氐料培养瓶中诱导培养,浚天换液一次。分别于诱导培养的第、、原的ㄈ旧ǎ绷羧∨嘌锨澹心蛩氐9δ艿募觳狻、、六组第斓南赴科鱿諥、一的表达,组均与、、、、一的表达逐渐消失,而白蛋白、肝细胞抗原开始在胞浆内表达,在天的细胞涂片除两组阴性表达外,上述六组均出现白蛋白、肝细胞抗原的高表达,各组间的表达差异与诱导第焓盇、一的组间表达差异相同。并且随着诱导时间的延长,、、组呈阴性。透射电镜发现,人骨髓一狣幌赴诘慕峁勾釉嘉捶只刺步发育成幼稚状态,最终发育成类肝细胞结构。瓾和/或具有诱导人、—一细胞向表达白蛋白和肝细胞抗原的肝细胞样细胞分化的作用。瓾和/或具有诱导人、细胞向功能性的肝细胞样细胞分化的作用。忠菏视谌薆獶幌赴蚋蜗赴赴盏挤只奶逋馐验研究。瓼一唤瞿芄淮俳撬韪上赴脑鲋常夷芄挥盏脊撬韪上赴蚋蜗赴样细胞分化;而荒苡盏脊撬韪上赴蚋蜗赴赴只瓼一一虷联用对诱导人、狣幌赴虮泶顰、、白蛋白和肝细胞抗原的肝细胞样