三磷酸胞苷二钠诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的研究.pdf

河北医科大学
硕士学位论文
三磷酸胞苷二钠诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的
研究
姓名:魏书艳
申请学位级别:硕士
专业:神经病学
指导教师:李育臣
20050301
中丈摘要
三磷酸胞葺二钠诱导骨髓间充质千细胞
分化为神经元样细胞的研究
摘要
目的骨髓中除造血干细胞外,还存在一种间充质干细
胞,具有向骨细胞、软骨细
胞、肌细胞、神经细胞等多向分化的能力,是继胚胎干细胞
和神经干细胞之后,又一种在体内外均能向神经细胞分化的
干细胞。由于其具有取材方便简单,易分离扩增等特点,
作为神经系统疾病细胞治疗或基因治疗的种子细胞,
有着广泛的应用前景,是神经细胞移植理想的供体。为了探
讨三磷酸胞昔二钠对骨髓间充质干细胞分化为神经
元样细胞的作用,本课题用作为诱导剂,诱导
向神经细胞转化,以期为用于神经细胞移植提供重要
基础。
方法
取成年大鼠,麻醉处死后取双侧股骨的骨髓,用
贴壁培养法分离纯化骨髓,传代扩增,连续观察细胞
形态及生长特性。
取生长良好的代细胞,消化后调整细胞浓度
为,接种于孔板,每孔,用法每天
固定时间测定细胞的吸光度值,连续。以时间天
为横坐标,值为纵坐标,绘制生长曲线,计算细胞倍增
时间,并对三代细胞的值进行统计学分析。
中文摘要
用诱导剂〔对进行诱导。在其它诱导条件
不变的前提下,对比不同浓度的对诱导后分化
为神经细胞比例的影响。按的浓度分为以下几组
,于诱
导后对细胞表达神经微丝蛋白,胶质原性纤维酸性蛋白
,神经元烯醇化酶的免疫组化的检测。计算阳
性细胞比例,进行统计分析,选出合适的诱导剂量对比
不同诱导时间对分化为神经细胞比例的影响,按诱
导时间分组,通过免疫组化的方法
进行检测,并计算阳性细胞比例,进行统计分析,找出合适
的诱导时间。
具有多向分化潜能,为证明我们培养的细胞具
有多向分化潜能,采用成骨细胞诱导液一甘油磷
酸钠,地塞米松,维生素胎牛血
清的培养液诱导周,行改良钙钻
碱性磷酸酶检测以鉴定成骨细胞形成。
结果
分离得到的单个核细胞贴壁,细胞多呈梭形,多
角形,培养可达融合。传代细胞内完全贴壁,
细胞形态较均一,呈长梭形,旋涡样生长,一般内可达
融合。
不同代骨髓的生长曲线
第代细胞生长曲线基本相同,呈形。传代后
第天为细胞生长的潜伏期,第天为指数生长期,约
第天进入平台期,细胞倍增时间约。方差分析
三代细胞间无统计学差异。表明骨髓体外稳定扩增,
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中文摘要
有很强的增殖能力。
诱导为神经元样细胞
用含浓度的诱导剂进行诱导时,随
浓度增高, 和阳性细胞比例也呈现逐步
增高趋势,经免疫组化检测及统计分析,浓度为
时,能够诱导和阳性细胞比例为
、、,显著
高于对照组。诱导时间,随时间的延长三
种阳性细胞的比例也呈现逐步增高趋势,经免疫组化检测及
统计分析,诱导时间为时,能够诱导和
阳性细胞比例为、、
,显著高于对照组。
向成骨细胞诱导
向成骨细胞诱导周后,实验组碱性磷酸酶染色阳性,
对照组碱性磷酸酶染色为阴性
结论
实验中分离培养的单个核细胞呈贴壁生长,成纤维细
胞样外观,具有典型的形态特点,并证明其可以同时向神经
元样细胞和成骨细胞分化,具有多向分化潜能,表明从骨髓
分离培养的细胞为骨髓间充质干细胞。
是一种很好的体外诱导剂,可以诱导向神
经细胞和神经胶质细胞分化,以作诱导剂,
能够获得较明显的诱导的向神经细胞和神经胶质细胞
分化的结果,诱导后能有效向神经细胞和神经胶
质细胞分化。
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中文摘要
关键词骨髓间充质干细胞诱导分化神经元细
胞培养三磷酸胞昔二钠
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英文摘要






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研究论文
三磷酸胞昔二钠诱导骨髓间充质干细胞
分化为神经元样细胞的研究
前言
骨髓中除造血干细胞外还含有另一类干细胞,即间充质
干细胞,具有很强的自我复制
和多向分化潜能,可以被诱导分化为骨骼、心肌、肝细胞、
神经胶质细胞和神经元等,是继胚胎干细胞和神经干细