小球藻外源基因转化系统的建立及其表达植酸酶的研究.pdf

摘要抗生素的敏感性,确定了小球藻基因工程适用的抗生素筛选标记。并以抗生素为菌的海水小球藻完整细胞为受体,以蜃魑1ǜ婊颍呕说缁髯;件。在此基础上,将植酸酶基因转入小球藻中,获得了转基因藻株。这不仅为低成本生产植酸酶,使其得以广泛应用,创造更大的经济效益和社会效益打下了基础,同时也为藻类生物反应器的建立及广泛应用开辟了道路。具体研究内容及结⒀芯苛撕K∏蛟宥殖<股氐拿舾行约暗嘌孕∏蛟迳化十倍培养基中的半致死剂量。实验结果表明,小球藻对卡那霉素、庆大霉素、新霉素、氨苄青霉素、头孢霉素、链霉素都不敏感,这几种抗生素在实验范围内不对小球藻的生长产生明显抑制;小球藻对潮霉素较敏感,对则很敏感,小球藻对抗生素的敏感性大为提高。适合作为小球藻基因工程的选择试剂,其在固体培养基中的适宜筛选浓度为/。⒀芯苛艘钥股匚3ぞ撸⑿∏蛟逦蘧嘌逑档耐揪丁J紫炔本文在国内外首次报道了植酸酶基因在海水小球藻/中的稳定表达。以营养丰富的海水小球藻作为生物反应器来生产植酸酶,直接作为一种无毒无害的绿色饲料添加剂,可避免复杂的提纯分离工艺,具有广阔的开发前景和潜在的经济价值。本论文首先测定了海水小球藻对种除菌工具,获得了无菌的小球藻藻株,优化了无菌小球藻的培养条件。然后以无果如下:的影响,并测定了潮霉素、、氯霉素、对小球藻在海水培养基和淡对氯霉素、极敏感。淡化十倍培养对小球藻的生长没有显著影响,且能使定了小球藻培养液中的细菌对小球藻不敏感的挚股氐拿舾行裕缓笱芯苛适于小球藻除菌的抗生素组合和处理浓度及加入抗生素对小球藻和细菌生长的影响。结果表明小球藻培养体系中的细菌对庆大霉素、氨苄青霉素、卡那霉素、头孢霉素和链霉素非常敏感,利用涂平板挑单克隆法去除霉菌后,将这五种抗生素均以终浓度/加入小球藻培养体系中,处理两次,获得了无菌的小球藻藻株。进一步研究了接种密度、光强、和温度对小球藻生长的影响,并在无菌培养条件下,对影响无菌小球藻生长的五种主要营养因素:、、、辛擞呕5肗球藻适宜的培养条件为:初始接种浓度取藻体细胞数为个/左右;范围在左右;培养温度为士℃;光照强度约为甇×.。通过五因素四水平正交实验,得到适于无菌小球藻生长的优化培养基配方为:/8糜呕浞郊由蟙⒘吭K睾缶哂大连理上火学博士学位论文疞、疞、¨疞、.
方嚣蠢穰大鬟裹,扶℃提嶷到℃;在爨逶终月蠼上邈有较大交往。嚣个明显的生长优势。⑿薏け:3卸岜≡逋暾瞻疚J芴澹醣驝痸宥梵晡’羔内进蠢瞬阕表达,磺究了电壹转讫条传、渗遴处理、夕碊浓度、运载浓度和小球藻细胞生长时期对转化效率的影响。结果表明,在穆龀宓缪埂燃诹绯中卑辍鲚詝孛簇嚣窝豹踩狰次数下魄击可获褥较衰戆转化效率;渗遴处理能恩著提商转化效率;运栽呐ǘ任/、成粒ǘ任/时转亿效率最纛;两且袋子对数生长早麓验小球藻缨爨辩终源基阁有更强的吸纳能力,能获得较高的转化效率。⒃谟糯苛X乓继醮窍拢爵睾欣垂鯻予无蕊采鍪霉甪的檄酸酶基因的表达载体/与无菌的海水小球藻完熬细藏共转强,缀狗旌踉狙检测、杂交检测、检测、槭酸酶活性检测,确认获得转植酸酶基因的小球藻藻株,且基阻在毒球藻缨黪孛歪紫转蒙莠褥翻表达。转基霞夺球藻熬蕴酸赘往覆与蠢花采灏霉甪,闹菜崦感灾时冉媳砻鳎∏蛟灞泶锏闹菜崦冈谧钍首饔梦露最适作用值分别从变为,变为。关毽谰;夺球藻;选择标记;无菡臻养;颍恢菜崦刚衾游调控元件,以菠因作为报告基因,利用电击法将胍蜃H胄∏蛟逑赴小球藻外源基因转化系统的建立及其表达植酸酶的研究
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独剑燃声明究工作及取得研究成果。尽我所知,除了文中特剐加以标注和致谢的避方外,论文中不包含其德人已。经发表或撰写的磅究成果,也不包含为获得大连理工大学或其他单位的学位鬣证书所使灞过的树料。与我~同工作的同志对本研究所做的贡献均已诼畚闹邪亮嗣魅返乃得徉者签名:作者郑重声明:本博士学位论文是我个人在导师指导下进行的研并表示了谢意。期:日
作者签名:至迤互导师签名故悄大连理工大学学位论文版权使用授权书本学位论文傍者及攒导教烬宠全了翳“大连理工大学硕±、媾±学校文版权使用规定”,同意大