waters高效液相色谱.doc

W aters 高效液相色谱操作说明一. 简介本高效液相色谱实验包括: waters1525 泵+waters2487 双波长检测器+ 色谱柱+ 电脑( breez e 图谱处理软件) + 流动相二. 操作流程 0. 准备工作确定色谱实验方法,处理好流动相 1 ,换好流动相,确定色谱柱选择无误 1. 开机打开泵开关,听到两声“嘀”的响声之后,再打开波长检测器。检测器进入预热阶段( 此时检测器面板进入 5min 倒计时) 这期间打开电脑, 进入英文 windows 操作系统 2 ,待检测器自检完毕(整个自检过程约 6~7min ) ,打开电脑桌面的( Breez e 软件) 。待程序完全启动,整个开机过程结束。系统默认进入上次使用的方案。 2. 建立新方法和新方案 新建方案方案主要用来储存你的各个实验方法,数据等内容,你可以把它理解为一个文件夹。 创建步骤选择→单击→单击"next" →在"project name" 中输入方案名称(如 abc ), "comments" 中可填注释,也可不填。→单击"finish" 打开创建的方案在界面下→单击→在"project" 中找到你创建的方案( 如 abc )→点击"OK", 即进入到我们自己的方案中了 新建方法在新建的方案中,需要建立不同的试验方法。试验方法主要设定的包括洗脱方式, 检测波长等参数。 新建方法步骤单击→单击→单击( Flow 选项卡) →在 programmed flow 中设定你的洗脱方式(此步在 详述) →单击→单击( channel 1 选项卡) →在"wavelength" 框内设定你的检测波长(如 265nm,280nm,215nm 等等) →(设定结束, 保存): 单击→输入方法名称如( abc 1 )→单击"save" 3 洗脱方式的设定(重要) 在 programmed flow 中可看到。其中 Isocratic 为等度洗脱, Gradient 为梯度洗脱。以下我们来分述。 若你用等度时( Isocratic ): "pump mode" 中选择"Isocratic" 表格中"Isocratic Flow A" 为流动相 A 的流速,"Isocratic Flow B" 为流动相 B 的流速, "Total Flow" 为总流速。例如:假设方法要求用乙腈做 A 相,用纯水做 B 相,乙腈占 70% ,水占 30% ,等度,则: 若你用梯度时( Gradient ): "pump mode" 中选择"Gradient" 表格中第 1 行默认已有,单击下面空白行处添加新行。"Time" 为时间,即此行开始时间; "Flow" 不作更改,保持 1ml/min 的总流速; %A 处填 A 相比例; %B 处填 B 相比例; curve 处为曲线型号,一般不变。例如: 假设用方法要求乙腈做 A相, 用纯水做 B相,0— 10min 乙腈从 100% 到 50% ; 10— 30mi n 乙腈从 50% 到 40% ; 30— 60min 乙腈从 40% 到 80% ;则: 洗脱设置完毕继续按照 完成方案的创建。 3. 洗泵和平衡方法设定完毕,我们还要进行洗泵与平衡