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广东药学院
硕士学位论文
人B7-2分子和肿瘤特异性TCR对T细胞协同活化的研究
姓名:刘洪洲
申请学位级别:硕士
专业:病原生物学
指导教师:黄树林
20100501
广东药学院硕士研究生学位论文
人 B7-2 分子和肿瘤特异性 TCR 对
T 细胞协同活化的研究
作者:刘洪洲(病原生物学专业硕士研究生)
导师:黄树林教授
中文摘要
目的研究 B7-2 基因修饰的肿瘤细胞对淋巴细胞的募集作用及对淋巴细胞的活化作
用,同时探索 B7-2 基因修饰肿瘤细胞联合肿瘤特异性 T 细胞受体(TCR)基因修饰
的淋巴细胞的协同抗肿瘤作用。
方法克隆 B7-2 基因,并将其构建在真核表达载体上,然后利用脂质体法转染肿瘤细
胞 Bel-7402 后通过 RT-PCR 和 FCM 检测 B7-2 基因的表达。利用羧基荧光素二醋酸盐
琥珀酰亚胺脂(CFSE)标记转有 B7-2 基因的 Bel-7402 细胞,同 PBMC 共孵育后检
测 CFSE 阳性细胞的凋亡率。利用携带肿瘤特异性 TCR 基因的重组腺病毒
Ad-TCRVα12-2/ 转染外周血单核细胞(PBMC),同转有 B7-2 基因的 Bel-7402
细胞共孵育后利用流式细胞仪测定 Bel-7402 细胞的凋亡率。
结果 B7-2 基因转染 Bel-7402 细胞后表达水平显著上调。经 B7-2 基因修饰的 Bel-7402
细胞和 PBMC 共培养 4h 后,凋亡率为 %,与对照组(%) 比较,细胞凋亡
率显著增加(p<)。Ad-TCRVα12-2/ 修饰的 PBMC 与 B7-2基因转染的 Bel-7402
细胞共孵育 48h 后,B7-2 与 TCRVα12-2/ 联合转染组、B7-2 单转组、
TCRVα12-2/ 单转组和未转染组等 4 组结合 PBMC 的 Bel-7402 细胞的阳性率(结
合率)分别是 %、%、%和 %,相邻两组之间的结合率都存在显著
差异(p<),其中 B7-2 与 TCRVα12-2/ 联合转染组的结合率最高。B7-2 与
TCRVα12-2/ 联合转染组结合 PBMC 的 Bel-7402 细胞的凋亡率是 %,和 B7-2
单转组(%)与 TCRVα12-2/ 单转组(%)比较,凋亡率都显著增加
(p<)。而且,在激光共聚焦扫描显微镜可观察到 B7-2 修饰的肿瘤细胞促进了 T
细胞的募集和活化。
结论 B7-2 转染肿瘤细胞能增加对淋巴细胞的募集作用和对淋巴细胞的活化作用,并
且与 TCR 修饰淋巴细胞一起能够协同促进募集淋巴细胞,同时增强淋巴细胞对肿瘤
的杀作伤用。
关键词: B7-2 基因,肿瘤细胞,腺病毒,T 细胞受体,活化
I
广东药学院硕士研究生学位论文
Research on T cell synergistic activation by
human B7-2 and tumor specitific TCR

Author: Liu Hongzhou ( Major Biological Etiology)
Supervisor: Professor Huang Shulin
Abstract
Objective Research on B7-2 gene modified tumor cells on lymphocytes recruitment and
activation, as well as B7-2 gene modified tumor bined with tumor specitific T
cell receptor(TCR) modified lymphocytes synergistic reaction on anti-tumor .
Methods To clone B7-2 gene , construct in eucaryotic expression vector, and then transfer
to tumor cells Bel-7402 by liposome transfection reagent,which expression hereafter was
detected by RT-PCR and flow cytometry(FCM). To label Bel-7402 cells transfected by
B7-2 gen