脾酪氨酸激酶（syk）甲基化失活与结直肠癌关系研究.pdf

中山大学
博士学位论文
脾酪氨酸激酶(Syk)甲基化失活与结直肠癌关系的研究
姓名:杨祖立
申请学位级别:博士
专业:外科学
指导教师:汪建平
20060401
脾酪氨酸激酶谆Щ钣虢嶂背Π┕叵档难芯中文摘要【研究背景】专业:外科学申请人:杨祖立导师:汪建平教授结直肠癌是消化道常见的恶性肿瘤,其发病率在国内为第四位,居癌症死因的第三位。随着的提高,生活方式和饮食习惯的改变,其发病率有逐年上升的趋势,而且发病年龄也趋向年轻化。结直肠癌的发生是一个多因素、多基因、多过程综合作用的序贯过程,在这个发生过程中,既有遗传学方面的改变,又有表观遗传学方面的改变。前者包括基因突变、缺失和杂合子丢失珹等,后者包括基因的甲基化以及组蛋白的修饰鏜琱等=嶂背Π┎∫虻难芯慷杂谡锒稀⒅瘟啤⒃し朗鹾蟾捶⒑驮げ馐鹾笊婢哂极其重要的意义。人们对于遗传学方面改变的研究,比较深入和广泛,而且有些指标已经广泛应用于临床,如结直肠癌患者术后血清缴呋蚋哂谑跚水平,则高度怀疑术后复发。而表观遗传学方面的研究,则是近十几年来在肿瘤发生机制方面新出现的研究热点,它不同于传统的遗传学改变,而是肿瘤发生的另一种机制,是对肿瘤发生假设理论“二次打击学说”’牟钩洹O钟械难芯拷峁砻鳎诖蟛糠纸嶂背Π┑姆⑸⒎⒄构中,既存在遗传学上的异常,又可存在表观遗传学的异常,基因表观遗传学的改变,不仅协同遗传学的改变参与肿瘤的发生和发展,而且在某些情况下有可能是肿瘤发生的唯一机制,为研究结直肠癌的发生、发展以及复发和预后提供了一条新的途径、方法和生物学指标。表观遗传学的改变包括基因的甲基化和组蛋白的修饰。前者是指在甲基化转移酶淖饔孟拢ǖ鞍彼岬幕钚约谆R频桨奏さ牡谖逦惶荚由希中山大学博士论文甴
因的启动了区域,也可以出现存外显子和内含子中。甲基化昀发生既有年龄特异预后及其复发等的相关性,同时也研究甲基化的模式、密度和失表达的机制等。其失表达状态机制的研究较少,等的研究表明在乳腺癌中,氖П泶形成谆奏籱,真核生物中胞嘧啶的甲基化修饰主要发生在岛上,少数发生存珻/虶希⑸谆腸<诨性型又有肿瘤特异型犁T谥琢鎏匾煨缘募谆校扔幸职┗的甲基化,又有癌基因的甲基化。基因甲基化的研究主要集中在抑癌基因的研究上,研究比较多的基凼有,琍和龋⑸谆囊职┗因常常因为转录抑制而失去蛋白表达,对原癌基因的研究则较少。组蛋白的修饰包括乙酰基化、甲基化、磷酸化和泛素化等,主要是组蛋白去乙酰基化和甲基化。组蛋白乙酰化后染色体处于开放状态而利于转录,并上调基因的表达,而低乙酰化则抑制或下调基因的表达。组蚩白甲基化的机制比较复杂,不坏恪⒉煌基酸和不同的甲基化模式决定组蛋白有不同的活性。基因甲基化和纽蛋白的修饰是表观遗传学研究的两个重要方面,二者可以单独调节基因的表达,也可以共同作用,相互影响,共同调节基因的表达,在大多数情况下,二者足共同作用的。⑸谆螅谆岷系白杂爰谆陌奏そ岷希胬髡心甲榈鞍去乙酰基化酶、甲基化转移酶等形成抑制性复合体重塑染色质结构,抑制基因的表达。表观遗传学的研究材料包括组织标本、休液标本和肿瘤的细胞株等;其研究内容包括甲基化失表达与肿瘤俅膊±硖卣髦实墓叵怠⒂胫琢龇⑸⒎⒄埂脾酪氨酸激酶琒欠鞘芴艴で馑峒っ傅囊恢郑惴表达在血细胞中,参与淋巴免疫细胞的信号传道,调节细胞的增生、增殖和分化。它的功能和活性在细胞内受到严格的调控,其功能的丧失将会导致机体免疫力的下降,从而促进正常细胞的恶性变。热耸状伪ǖ懒薙在正常乳腺上皮中高表达,在原位癌中低表达,在浸润性导管癌中不表达,其表达状态与乳腺癌淋巴结转移呈负相关。多个报道提示诙嘀稚掀は赴斜泶铮枪赜与其启动子杭谆叵得芮校谆赡苁瞧涫Щ畹闹饕;苹蛘呤俏一机制。诮嶂背Π┫赴瓯泶铮移浔泶镉敕窈蚉突变有关,为本课题的研究提供了前提和支持。本研究应用亚硫酸盐修饰测序法、甲基化特异『生聚合酶链反心法和逆转录聚合酶链反应法等榆测蛟诮嶂背χ琢鲎橹拖中山大学博士论文脾醅氢酸激酶谆Щ钣虢嶂背Π┕叵档难芯
;血清甲基化状态与术后复发、转移的相关性,为结直肠癌的淋巴转馥和术后复发【材料和方法】胞株中的甲基化状态和表达情况,探讨蚣谆刺徒嶂背Π┝俅膊±特征之间的关系,揭示了的谆П泶镉虢嶂背Π┝馨徒嶙R频南喙匦裕提供了一个生物学指标。分析了结直肠癌细胞株中虻募谆捅泶镒态,应用甲基化转移酶抑制剂和组蛋白去乙酰基化酶抑制剂,可以部分或全部恢复甲基化虻谋泶铩M庇τ糜ü馑孛副ǜ娣治龇ㄈ啡掀舳忧駽岛甲基化引起槐泶铮⒂τ萌旧拭庖叱恋矸ń沂酒舳蛹谆鸺谆化结合蛋白、甲基化转移酶以及组蛋白去乙酰基化酶等与甲基化的胞嘧啶共价结合,引起染色质结构发生变化,使其由开放状态变为关闭状态,阻止转录因子与其特异性识别位点结合,抑制转录而使其失表达的机制,这为临床应用甲基化酶抑制剂和组蛋白去乙酰基化酶抑制剂提供了依据,