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PCR技术及其应用
生物化学实验技术
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目 录
PCR的反应原理
PCR的类型和应用
PCR示例
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多聚酶链式反应
（PCR：Polymerase Chain Reaction)
Kary B. Mullis
PCR是由美国科学家穆利斯提出的一种
体外简化条件下模拟DNA体内复制的DNA
快速扩增的方法，此技术获得1993年诺贝
尔化学奖。
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体内DNA的复制体系
DNA聚合酶（I II III）
拓扑异构酶
解旋酶类
SSB
引物
dNTP Mg2+
5’
3’
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Mullis的PCR构思
引物
引物
DNA聚合酶
DNA聚合酶
特定DN***段
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Taq DNA聚合酶（thermus aquaticus)
酶活性(%)
温度(℃)
40 50 60 70 80 90 100
100
80
60
40
20
耐热DNA聚合酶
Saiki（1988）将耐热DNA聚合酶引入PCR，使利用热变性解链DNA模板可行。
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PCR反应循环
72℃
94℃
55℃
PCR循环
变性
退火
延伸
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PCR的指数扩增（2n）
引物
延伸
延伸
5’
5’
3’
3’
变性、退火
变性、退火
变性、退火
延伸
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Taq
P1
P2
PCR反应体系
dATP
dTTP
dGTP
dCTP
Mg2+
模板：DNA
引物：P1 +P2
DNA聚合酶：TaqE
原料：dNTP
反应缓冲液10xBuffer
辅助因子：Mg2+
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1）PCR反应成分
（1）模板
单、双链DNA均可。
不能混有蛋白酶、核酸酶、DNA聚合酶抑制剂、DNA结合蛋白类。
DNA模板一般100ng /100L。
模板浓度过高会导致反应的非特异性增加。
PCR反应条件
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