Bt毒蛋白cryIAbAc基因在毕赤酵母GS115中的表达研究 (1)论文.pdf

夜蛾的Ⅸ:为即咖毒蛋白对甜菜夜蛾的为痾痬珻/毒蛋白对二化螟的“巯为緈珻镜鞍锥远膗‰为即痬在甲醇的诱导下,刚鮟毒蛋白都得到了有效分泌和表达。通过甈摘要是农业生产中运用得非常广泛的一种重要的杀虫微生物。由于在使用过程中存在一些不足和害虫抗药性的产生,人们通过生物技术的手段将毒蛋白基因转入其它植物或微生物中,扩展了的杀虫谱并降低害虫对其的抗性。本研究将毒蛋白基因克隆到毕赤酵母中,构建带有/基因的工程菌。运用砑杓拼邢拗菩阅谇忻窷盖形坏愕囊铮过姆椒ɡ┰鯿虼嗦攵镜鞍个结构域的序列,并对这两条基因片段进行了亚克隆,构建出载体。将建载体/进行序列测定,其中基因有黾罨⑸谋洌嗦胍桓霭被岱⑸谋洌但不编码毒蛋白的活性中心:基因与原基因序列相同。选择毕赤酵母表达载体,利用限制性内切酶盖衟瓵疉捅泶镌靥,再通过连接酶连接,构建出分泌型重组载体疉S玫转化方法转化到毕赤酵母秆〕鲅粜宰;印鉴定证明基因已成功转入毕赤酵母小凝胶电泳分析,/基因表达的重组蛋白都在笥摇5庇盏紁滴时,摇瓶诱导发酵小时的蛋白表达量都达到最大。生物测定结果表明,毒蛋白对甜菜夜蛾和二化螟都有较强的毒杀作用。剃镜鞍锥蕴鸩关键词:苏云金芽胞杆菌,/基因,毕赤酵母,表达苏云金芽胞杆菌虴
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学位论文储始桶导师签二:貔签名日期:嘭叩年‘月膨日签名日期:伽年拢日研究生签名:鬈时陬辍卵枞华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学位论文使用授权书如需保密,,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,指导教师对此进行了审定。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明,“华中农业大学关于保存、使用学位论文的规定”,即学生必须按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本;学校有权保存提交论文的印刷版和电子版,并提供目录检索和阅览服务,可以采用影印、、::请将本表直接装订在学位论文的扉页和目录之问学位论文是否保密
第一部分前言赵平鹧堪司瞫研究进展苏云金芽胞杆菌晶体毒蛋白的分类年,日本病毒学家在感病的蚕蛾中发现了一种致病菌ǖ笔泵挥斜4嫦吕础辏珺拥鹿赵平鹗〉牡刂泻7勖嫌重新分离到了这种致病菌,并正式命名为苏云金芽胞杆菌简称矾K赵平鹧堪司且恢指俗吹母窭际涎粜韵妇D苄纬赡谏堪惴存在于各种生态环境中。在形成芽胞的同时能够形成一种伴胞晶体,其中含有一种或几种杀虫晶体蛋白,简称磀诙舅亍W源首次分离得到苏云金杆菌以来,在世界范围内已分离到超过鼍辍6云渖虫谱的了解,由最初的对鳞翅目的毒性逐渐扩展到双翅目、鞘翅目、直翅目等目的昆虫,同时还发现有些菌株对扁形动物门、线形动物门、原生动物门中的某些有害种类有毒杀作用。由于其具有高效性和安全性,制剂在农产品安全性和农业生态环境的保护上具有重要意义,已发展成为目前世界上应用最为广泛的微生物杀虫剂。自从年等人从库斯塔克亚种菌株中克隆出第一个苏云金芽胞杆菌的杀虫晶体蛋白基因岳矗磕甓加写罅康男翴虮环掷和克隆,年已增至嘀帧闔和根据基因的杀虫活性和同源性,将当时克隆的种基因分为啵篊、、F渲蠧粤鄢崮俊对鳞翅目和双翅目、对鞘翅目、运翅目、运ǔ崮坑猩背婊钚浴辏珻等在无脊椎动物病理学年会口鲜状翁岢觥⒉⒂攴⒈砹艘桓鲂碌腃杀虫晶体蛋白的分类方法。这种分类方法是根据氨基酸同源性,而不是根据内毒素氨基酸序列的同源性将进行分级分类,因而形成了一个开放式的分类系统:同源性在%以下为第一等级,用阿拉伯数字表示;同源性在%~%之间为第二等级,用大写英文字母表示;同源性在%~%之间为第三等级,用小写英文字母表示,同源在%以上为第四等级,用阿拉伯数字表示。只要满足来自的伴胞晶体,对目标生物具
忙慕一——晕一厂广——匕三铲有毒性,或者与已知的駽蛋白具有高同源性,就可以纳入这一分类系统。目前,已发现稚背婢宓鞍谆颍质粲海珻基因群种模式基因,图。。.—●●’,
叫——————一厂一一一—:■一‘一一孩—￥苏云金芽胞杆菌晶体毒蛋白的结构、功能及作用机理目前研究最多的是的晶体蛋白,它们由~个氨基酸组成,分子量为。晶体蛋白的司哂懈叨鹊谋J匦裕葱源笥ィ籒涨铲图核赵平鹧堪司渌麮蛋白树状分类图髍//—≯.,
利用煳,射晶体图谱的方法已经确定了、三种基因所编形成。含有龇聪蚱叫械淖校鄣帕谐伤降膒棱柱折叠端差异较大,同源性只