高效液相色谱仪.ppt

高效液相色谱仪与操作规程
肖义坡
2014-08-23
一、液相色谱仪简介
1、定义：
英文名：Liquid Chromatography ，利用混合物在液-固或不互溶的两种液体之间分配比的差异，对混合物进行先分离，而后分析鉴定的仪器。
系统由储液器、输液泵、进样系统、色谱柱、检测器、
记录仪等几部分组成。
进样系统：一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成
进样操作，进样量是恒定的。这对提高分析样品的重复性
是有益的；
输液系统：该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪
三部分；
分离系统：该系统包括色谱柱、连接管和恒温器等；
数据处理系统。
2、液相色谱的结构
3、液相色谱的工作原理
储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。
二、高效液相色谱仪的操作规程
步 骤
第一步
第二步
第三步
第四步
准备
开
机
清洁
关机
注意
事项
第一步、准 备
1 、准备所需的流动相，，超声脱
气20min。
2 、根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱和定量环。
3 、配制样品和标准溶液，。
4 、检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接
正常。
注意方向
也可在平衡系统时配制
第二步、开 机
接通电源，依次开启不间断电源、真空脱气机、四元泵、检测器，待泵和检测器自检结束后，打开电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站。
一）参数设定
1、 波长设定：单位nm
2 、流速设定：单位mL /min
3 、流动相比例设定：v/v
4、 梯度设定：
二）更换流动相并排气泡
1 ：将吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；
2 ：顺时针转动泵的排液阀180°，打开排液阀；
3 ：运行泵，泵以3ml/min的流速冲洗5min（可设定）后泵流速设为0ml/min；
4 ：将排液阀逆时针旋转适度拧紧，关闭排液阀。
5 ：如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。
三）平衡系统
用检验方法规定的流动相冲洗系统。
检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。
观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按检查管路后再操作。
观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<，噪声为<，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。
一般最少需6倍柱体积的流动相
四）进 样
1 、进样前按检测器[balance]键调零，按软件中 [零点校正] 按钮校正基线零点，再按一下 [查看基线] 按钮使其弹起。
2 、用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量即可以进样了。
3、含量测定的对照溶液和样品供试溶液每份至少注样2次 。