地衣芽孢杆菌KL6对鲤鱼生产性能及消化酶活性的影响.pdf

分类编号: 单位代码: 10065
级: 学号: 092 070 54
卞砷汔* 嗲
研究生学位论文
论文题目:地衣芽孢杆菌 K L 6 对鲤鱼
生产性能及消化酶活性的影响
学生姓名: 刘阳申请学位级别: 硕士学位
ٷ动物学ٷ申请专业名称:
ٷ分子生物学方向ٷ研究方向:
指导教师姓名: 潘宝平专业技术职称: 教授
提交论文丨」丨期: 20 12 年 5 月 2 1 日
地衣芽抱杆菌 K L 6 对鲤鱼生产性能及消化酶活性的影响
摘要
近年来,随着我国鱼类养殖技术的迅猛发展,高密度集约化的人工养殖已经
成为水产养殖业的主流。因此,人们对鱼类优质饲料的需求日益增涨。但是,这
种高密度养殖经常导致鱼类病害频繁发生,由此引发的水产养殖中滥用抗生素及
生长添加剂等现象比较严重。养殖鱼体内的这些有害残留物不但严重威胁着人类
的食品安全,而且能够引发水环境的进一步恶化。因此,目前我国鱼类养殖业亟
待研发无毒、无残留、高效促生长的饲料添加剂。前人的相关研究资料表明,芽
孢杆菌不仅能有效抑制常见病原菌,还能提高动物消化酶活性并促进动物生长,
是一类良好的动物益生菌菌株。本研究依据益生菌筛选的常规方法和芽孢杆菌的
判定标准,从热泉中分离得到地衣芽孢杆菌 QB aciUus Licheniform is、K L 6 株,
并对其进行了体外益生性评价、发酵培养基及发酵条件优化,并进一步测定了不
同浓度该菌剂对鲤鱼(Cyp rinus carp io ) 生产性能及消化酶活性的实际影响。
研究者首先分离纯化得到 20 株芽孢杆菌,选择其中淀粉酶与蛋白酶活性最
高的菌株,经菌落与菌体形态观察、生理生化鉴定和 16SrD N A 序列分析后,将
其定名为地衣芽孢杆菌 K L 6 。
本研究进一步对地衣芽孢杆菌 K L 6 进行了抗逆性与益生性的体外评价试验。
通过抑菌性试验发现,该菌株对金黄色葡萄球菌有抑制作用,但对大肠杆菌与沙
门氏杆菌的抑制作用不明显。在高温耐受性试验中, K L 6 经 85 °C 处理 15m in 内
存活率无显著变化(P>),在处理 20m in 时才比处理 15m in 时存活率下降
% (P<) ,该结果说明 K L 6 菌株高温耐受性较强。K L6 菌株经过模拟动
物胃液与肠液试验,其活菌数受到模拟胃液 pH 的影响,随着 pH 值的降低而显
著下降(P C ),经 pH =4 、pH =3、pH =2 的模拟胃液处理后存活率分别为
50 .00% 、 0°/。、% ;经模拟肠液处理 4h 后存活率为 84 .4 0% 。该试验表明
地衣芽孢杆菌 K L 6 具有作为微生物饲料添加剂的潜力。
本研究还运用 4 因素 3 水平正交试验和单因素试验对地衣芽孢杆菌 K L 6 培
养基及发酵条件进行了优化。结果发现,4 种因素对 K L 6 活菌数影响的显著性次
序为:M n S0 4> N aC l > 酵母粉> 蛋白胨;对 K L 6 芽孢数影响的显著性次序为:
M nS0 4 〉蛋白胨> N aC l > 酵母粉。由此认为该菌株培养基的最佳配比为蛋白胨 1
地衣芽孢杆菌 K L 6 对鲤鱼生产性能及消化酶活性的影响
% 、酵母粉 % 、N aC l 1% 、25% 浓度的硫酸锰 % 。K L 6 菌株生长适宜温度
为 37 °C 。通过发酵罐放大培养结果确定,该菌株最佳的培养时间为 14 ? 16h ,
获得的菌体数量约 m L ,芽孢率达到 % 。以上数据表明地衣
芽孢杆菌 K L 6 能够适于高密度液体发酵,本试验为以 K L 6 为基础的微生物饲料
添加剂的开发和大规模发酵培养提供了理论依据。
另外,本研究还对地衣芽孢杆菌 K L 6 进行了鲤鱼投喂试验,即在基础日粮
中添加不同浓度的 K L 6 菌剂饲喂鲤鱼,随后测定不同浓度该菌剂对鲤鱼生产性
能及消化酶活性的影响。试验结果表明, 当菌剂添加量为 % 与 % 时, 鲤鱼
的增重率、饵料系数与对照组相比差异显著(P<),鲤鱼的平均增重率分别提
高了 14 .35% 和 % , 而饵料系数则分别下降了 0% 和 % 。在菌剂添
加量为 0 .5% 与 % 的试验组中,鲤鱼的食糜蛋白酶活性与对照组相比分别提高
了 % 和 % (P<), 且在菌剂添加量为 % 、% 与 % 时,其食糜
淀粉酶活性与对照组相比分别提高了