褪黑素mt含量试剂盒说明书hplc法50管48样.doc

褪黑素（MT）含量试剂盒说明书
HPLC法 50管/48样
请客户正式实验前做预实验确定样本稀释倍数！注意事项必读！
测定意义：
褪黑素（melatonin，MT）是广泛存在于包括人类在内的动物、原核生物、植物中的一种吲哚类小分子。在动物体内，褪黑素具有改善睡眠、减缓衰老、提高机体免疫力、预防和治疗抑郁症等多重功效。人体可以通过食用富含褪黑素的食物提高体内褪黑素水平。
测定原理：
褪黑素具有荧光吸收，可以利用高效液相色谱法测定其含量。
需自备的实验用品：
高效液相色谱仪（荧光检测器）、低速离心机、氮吹仪、涡旋震荡器、溶剂抽滤装置、针头式过滤器（有机系，50个，）、滤膜（水系和有机系各1个，）、C18柱（ ×250 mm）、可调式移液器、样品瓶（50个，2mL）、内衬管（50个，放置在样品瓶内用于微量样品进样）、甲醇（色谱级，400 mL）和超纯水。
试剂的组成和配制：
试剂一：粉剂一瓶，室温保存；
试剂二：液体一支，室温保存；
试剂三：液体60 mL×1瓶，4℃保存；
试剂四：液体60 mL×1瓶，4℃保存；
试剂五：×1支，-20℃保存。
实验前的准备工作：
1、将超纯水600 mL和甲醇400 μm的滤膜抽滤，以除去溶剂中的杂质，防止堵塞色谱柱。（注：蒸馏水用水系滤膜抽滤，甲醇用有机系滤膜抽滤）。
2、流动相的配制： g试剂一和量取500 uL试剂二加入600 mL过滤后的超纯水中，充分混匀溶解。将甲醇和超纯水按照40：60的比例混合配成流动相，混匀。
3、将配好的流动相超声30分钟，以脱去溶剂中的气泡，防止堵塞色谱柱。
褪黑素的提取：
血清的处理：，， mL试剂三，涡旋3 min，10000g离心10min，分层后弃去上层水相，将余下液体氮气吹干， mL甲醇，涡旋震荡溶解，用针头式过滤器过滤后待测。
植物组织的处理： g供试品，加入适量液氮进行研磨，磨碎后加入1 mL试剂四， mL有盖离心管中，25℃超声30 min，10000 g离心10 min， mL离心管中，氮气吹干， mL甲醇，涡旋震荡溶解，用针头式过滤器过滤后待测。
标准品的配制：
在试剂四中加入1mL甲醇，配成500μg /mL 母液，将母液用甲醇分别稀释成800 pg/mL、600 pg/mL、400 pg /mL和200 pg /mL的褪黑素标准品溶液。针头式过滤器过滤后待测。
褪黑素含量测定操作步骤：
1. 开启电脑、检测