光合细菌的分离及培养条件研究.doc

光合细菌 M-01 的分离及培养条件研究[ 摘要] 从湛江市霞山区海滩表层污泥中富集分离出红假单胞菌属光合细菌 M-01, 对其培养条件进行了初步探讨, 结果表明: 菌株生长温度为 30e 时, 最适培养光照度为 3 000 lx 。培养基正交试验结果表明其最优培养基配方为: 氯化铵2 g, 磷酸氢二钾 g, 乙酸钠4 g, 碳酸氢钠2 g, 氯化钠1 g, 酵母膏 g, 硫酸镁 g, 储液少量, 蒸馏水 1 000 mL; 其中乙酸钠为最大影响因子。[ 关键词] 光合细菌(PSB); 分离; 培养; 正交试验光合细菌(Photosynthetic bacteria) 是一类光合自养型古老细菌, 具有较强的分解有机物特性, 光合细菌作为水质净化剂广泛应用于水产动物如一些经济鱼类、虾蟹、贝类的养殖和育苗中[1~4] 。在生产上有意义的红螺菌科包括红螺菌属、红假单胞菌属和红微菌属[4] 。现已有学者对红假单胞菌的分离、鉴定、培养特性及保藏做了研究[5~7], 但还没有关于其营养条件优化的报道。笔者从海洋环境中分离到了光合细菌 M-01, 采用正交试验方法进行了培养条件优化的研究。现将结果报告如下。 1 材料与方法 材料(1) 待分离材料取广东省湛江市霞山区海滩表层污泥。(2) 培养基使用红螺菌科富集培养基作为富集分离基础培养基[8] 。 方法(1) 菌株的分离筛选方法取污泥 10 g, 装入 500 mL 细口无色玻璃瓶中, 加入富集培养液至满, 盖上瓶盖, 隔绝空气,于 30e, 3 000 lx 光照下进行富集培养 3~4 d, 培养液呈绛红色后, 取富集培养菌液 1 mL, 转接入培养液中, 重复以上操作 2次, 然后采用改良的 Hungate 厌氧培养技术))) 柱滚管法[9] 进行分离纯化, 用分离培养基的琼脂柱穿刺培养后保存。(2) 细胞色素光谱吸收峰值测定方法培养物离心后洗涤, 将细胞悬浮于 60% 的蔗糖溶液中,采用 722S 分光光度计扫描, 波长范围为 340~1 000 nm。(3) 生长量的测定为比较不同培养条件下( 光照、接种量、营养条件) 培养物生长量的差别, 采用 722S 分光光度计检测培养物 D660 nm 值。(4) 光照度对菌株生长影响的测定将已接种的光合细菌培养液于温度 30e, 光照度分别为 2 000 、 3 000 、4 000 、5 000 、6 000 lx 下培养 3 d, 每组 3管,用 722S 分光光度计测定培养物菌液光密度 D660 nm( 用培养初刚接种的培养液为空白对照)。(5) 酵母膏添加量对菌株生长影响的测定在培养液中分别加入酵母膏, 令其质量分数分别为 0100 、 0105 、 0110 、 0115 、 0120 、 0125 、 0130 g/L 。(6) 培养基正交试验根据预备试验,设计5因子4 水平的正交试验(表 1), 在温度 30e,3 000 lx 光照条件下进行培养基的正交试验。#72# 长江大学学报( 自科版)2005 年8 月第 2 卷第 8期/ 农学卷第 25 卷第 3期 Journal of Yangtze University(Nat Sci Edit)Aug. 2005 Vol12 No18 /Agri Sc