定量pcr介绍.ppt

September 21, 2016实时荧光定量PCR介绍宝生物工程(大连)有限公司1?主要内容Real Time PCR基础知识12Real Time PCR实验方法3Real Time PCR解析方法4Real Time PCR应用实例实时荧光定量PCR介绍2September 21, 20162?Real Time PCR基础知识1. Real Time PCR的用途及原理2. Real Time PCR的检测方法Real Time PCR基础知识1实时荧光定量PCR介绍3September 21, 20163?Real Time PCR的用途Real Time PCRReal Time PCR用途用途定性分析定性分析定量分析定量分析病毒及病原菌定量分析导入基因拷贝数解析GMO定量检测差异显示结果验证基因芯片结果验证siRNA效果确认mRNA表达量分析病毒及病原菌检测物种鉴定基因分型绝对定量绝对定量相对定量相对定量实时荧光定量PCR介绍4September 21, 20164?Real Time PCR的原理激发光发射光使用Real Time PCR扩增装置实时监测PCR扩增产物并进行分析的方法。Real Time PCRCt值实时荧光定量PCR介绍5September 21, 20165?Real Time PCR的原理同一个样品重复96次PCR的扩增曲线Ct值实时荧光定量PCR介绍6September 21, 20166?Real Time PCR扩增过程中,每个反应管内的荧光信号值达到设定的阈值时所经历的循环数。( C-代表Cycle,t-代表threshold)Ct值概念阈值:在扩增曲线的指数增长区域内适当位置上设定的荧光检出界限。Real Time PCR中的概念实时荧光定量PCR介绍7September 21, 20167?在PCR反应体系中加入荧光物质,并实时监测荧光信号积累的整个PCR进程,最后通过已知浓度的标准品制作的标准曲线对未知浓度的样品进行定量分析。Real Time PCR的原理实时荧光定量PCR介绍8September 21, 20168?生产厂商仪器名称TaKaRa公司Thermal Cycler Dice TP800Applied Biosystems公司ABI PRISM 7700、7000、7300、7900HT、7500FastRoche公司LightCycler? 、LightCycler? 480Cepheid公司Smart Cycler、Smart Cycler II、Smart Cycler ? TDBio-Rad公司iCycler iQ、iQ5 Real-Time PCR Detection SystemCorbett Research公司Rotor-gene2000、Rotor-gene3000 、Rotor-gene6000MJ Research公司Opticon、MJ Mini Cycler、MiniOpticonStratagene公司Mx4000?、Mx3000P?、Mx3005PTM杭州博日LINE-GENE FQD-33A、LINE-GENE FQD-66AReal Time PCR检测系统--简介实时荧光定量PCR介绍September 21, 20169?LightCycler? 480 Rotor-gene6000 MiniOpticon Mx3005PTMLINE-GENE FQD-66AABI PRISM 7500 iQ5 Real-Time PCR Detection SystemTaKaRa TP800实时荧光定量PCR介绍September 21, 201610