最新蛋白酶的发酵及酶活力测定实验报告.doc

蛋白酶的发酵及酶活力测定实验报告
蛋白酶的发酵及酶活力测定实验报告
学院：生物科学与工程学院
专业： 生物技术
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加完之后，置于40+，取出，用分光度计于波长680nm，10mm比色皿，以不含酪氨酸的对照管为空白，分别测定其吸光度值。以吸光度值A为纵坐标，酪氨酸的浓度C为横坐标，绘制标准曲线，计算出OD680=1时的浓度，即为吸光常数K值。
计算出OD680=1时的浓度，即为吸光常数K值，K=。
：
X= A×K×4/10×n
´式中：X——样品的酶活力，U/mL；A——样品平行试验的平均吸光度；K——吸光常数；4——反响试剂的总体积，mL；10——反响时间 10min，以 1min 计；n——稀释倍数。所得结果表示至整数。
第四章 试验方法

培养基的配置→活化菌种→培养取样→标准曲线绘制、生长曲线绘制和酶活测定


配方：、、NaCl 、水1000ml、~、 121℃灭菌20min。

牛肉膏3g/L或酵母浸粉5g/L 酪素10g/L NaCl 4-5g/L
— 先将酪素用少量2%氢氧化钠润湿，玻棒搅动，再加适量的蒸馏水，在沸水浴中加热搅拌至完全溶解〔10-15min〕，补足1000mL蒸馏水，参加其他成分，调PH分装灭菌。

将筛选好的并保藏在冰箱里中的未知的产蛋白酶实验菌接种2环于150 ml液体发酵培养基〔牛肉膏蛋白胨培养基〕的250 ml三角瓶中，30-32 ℃摇瓶发酵，在摇床里30℃震荡培养16到18小时，目的在于活化菌种并得到对数期菌种。在培养瓶中进行发酵。

-酚试剂：向2000mL的磨口回流瓶中参加100g钨酸钠()、25g钼酸钠及700mL的去离子水，再参加50mL85%的磷酸及浓盐酸l00mL，充分混合后，接上回流冷凝管，以文火回流10h，结束后再参加150g的硫酸锂(LiSO4)、50mL去离子水及数滴溴水，再继续沸腾15min，以驱除过量的溴，冷却后滤液呈黄绿色(如仍呈绿色，需再重复滴加溴水的步骤)，加去离子水定容至1000mL乱，过滤，滤液置于棕色试剂瓶中，贮于冰箱中可长期保存备用。此溶液使用时可按1:3比例用去离子水稀释。
***乙酸(TCA)溶液
，加去离子水定容至1000mL。

，加去离于水溶解后，定容至1000mL。
氢氧化钠溶液c(NaOH)=0. 5mol/L
盐酸溶液c(HCI)=lmol/L及0. lmol/L
(pH= )，适用于中性蛋白酶
称取磷酸氢二钠(Na,HP0,·12H,0)6. 02 g和磷酸二氢钠(NaH,PO,·2H,0)0. 5g ，加水溶解并定容至I000mL
l0g/L酪素溶液
称取酪素 ， lg， ol/L氢氧化钠溶液湿润后，加人适量的各种适宜pH的缓冲溶液约80mL，在沸水浴中边加热边搅拌，直至完全溶解，冷却后，转人100mL容量瓶中，用适宜的pH缓冲溶液稀释至刻度。此溶液在冰箱内贮存，有效期为三天。
100μg/mL酪氨酸溶液：
，逐步参加lmol/L盐酸6ml溶解后，，取此溶液10ml，,放入4度冰箱中保存。


2022年12月11号，星期三 ，整点8:00时，准时接入已经活化好的对数期菌种，用1000ul 的移液枪吸取5ml的对数期菌液参加到发酵瓶A中〔液体为酪素培养基〕，剩下的对数期菌种菌液置于4℃冰箱种中保藏于。并同时将A号发酵瓶放到摇床中，继续30℃震荡发酵。在直到20:00时