谷丙转氨酶.docx

谷丙转氨酶（GPT ）活性的测定预****报告
1•研究背景：转氨酶是体内重要的一类酶。转氨酶催化a-氨基酸的a-氨基与a-***酸
的a-***基之间的相互转化，从而生成一种新的氨基酸与一种新的***酸，这种作用称为转氨 基作用。它在生物体内蛋白质的合血测1
血测2
血测3
肝对1
肝对2
肝对3
血对1
血对2
血对3
备注：“肝测”表示“肝脏测定管”，“肝对”表示“肝脏测定对照管”，血清的简称亦然。
用EXCEL以各管吸光度减去1号管吸光度，所得差值为纵坐标，相应的***酸浓度为横坐 标，作标准曲线图；
每一步的作用
（1） 稀释肝脏匀浆液的作用是：因为酶量过高时，***酸产量与酶量之间更加不符合线性 关系，稀释后可以避免由于肝脏酶活力过高，对测定的影响；
（2） 测定管加入稀释后的肝脏溶液是为了提供谷丙转氨酶，作为对照管故不加稀释后的肝 脏溶液；
（3） 对基质液预热是为了使得一定时间内酶促反应温度恒定，加入基质液是为了让具有酶 的试管启动转氨反应；
（4） 准确保温 30min 是为了控制酶促反应时间，方便衡量酶的比活；
（5） 加入2,4-二硝基苯肼是为了使得转氨酶失活，同时作为与***酸反应的底物；
（6）对照管加入等量稀释后的肝脏是为了减少测定误差，尽量出去除***酸二硝基苯腙对 OD 值的影响；
（7） 溶液混合后，37°C水域20min是使得***酸充分地与2,4-二硝基苯肼反应；
（8） 加入 5ml 是为了提供碱性环境，使***酸二硝基苯腙呈现特异性光吸收。

时间分配（预计完成时间）：
6质疑及相关思考
（1） 转氨酶在细胞内的作用及生理意义？细胞内有众多的转氨酶，但相关研究及医学临床应 用中却几乎都是只检测谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）的活力，而极少测定其它转 氨酶活力，你推测可能的原因会是什么？为什么？
转氨酶在代谢中起着非常重要的作用，因为多数氨基酸都可以通过转氨酶作用脱去氨基 进行降解，并且所有氨基酸的合成过程中，其氨基酸都是直接或者间接地来自谷氨酸参与的 转氨基过程；医学临床中只是检测GPT和GOT，肝脏中GPT活力最高，GPT活力测定可诊断 肝功能的正常与否，急性肝炎患者血清中GPT活力可明显地高于正常人GPT，测定GOT活力 则有助于对心脏病变的诊断，心肌梗塞时血清中GOT活性显示上升。而其他转氨酶在身体各 个器官和部位相当，测量其他转氨酶对医疗方面指导意义不大。
（2） 转氨酶催化的是双底物可逆反应，根据酶活力测定的总体思路，在设计转氨酶的活力测 定实验方案时如何保证测得的是反应的初速度？为什么？
首先，在不影响测定的前提下保证底物浓度足够大；其次，考虑反应时间和产物浓度， 二者权其重的前提下尽量减少反应时间。由于此时产物浓度相对于底物浓度是非常小的，这 样就可以忽略逆反应带来的影响。
（3） 转氨酶测定是医学临床上用以检测相关疾病的重要指标，测定方法的历史建立了金氏法、 穆氏法及赖氏法（包括改良赖氏法），请查询资料，分别明确三种方法的酶活单位定义、各 自测定的酶促反应时间，三种方法的主要