金莲花中总黄酮抗氧作用的研究.doc

1 金莲花中总黄***抗氧作用的研究作者:颜娟,胡海娜,田嘉铭,杨国栋,曲彩红,王书华,安芳【摘要】目的研究金莲花中总黄***抗氧作用的能力。方法用分光光度法测定金莲花总黄***对 O2- ·、· OH 、 DPP H 的清除作用和对红细胞膜的保护作用,并与维生素 C 比较。结果金莲花总黄***有抑制 O2- ·、· OH 、 DPPH 的能力和保护红细胞膜的作用,金莲花总黄***的浓度与抑制 O2- ·、· OH 、 DPPH 的能力和保护红细胞膜的能力呈量- 效关系。结论金莲花总黄***具有较强抗氧作用。【关键词】金莲花总黄***抗氧化金莲花 Trollius chinensis Bunge. 为毛茛科植物金莲花的干燥花。据记载, 金莲花的功效为清热解毒[1]。现代药理研究表明金莲花具有很好的抗菌、抗病毒作用[2]。金莲花中总黄***是其有效成分。本实验通过研究金莲花总黄***对超氧阴离子、羟自由基、 DPPH 清除能力与红细胞膜的保护作 2 用证明金莲花总黄***的抗氧作用。 1 材料与仪器 药品和试剂金莲花采自河北省张家口坝上地区,经河北北方学院中医系中药教研室马淑兰教授鉴定为金莲花。芦丁标准品( 中国生物制品药品检定所), DPPH ( 二苯代苦味酰基苯肼自由基, 美国), 维生素 C( 中国生物制品药品检定所)。邻***, 双氧水, 邻二氮菲, 硫酸亚铁, Tris-HCl , 磷酸氢二钠, 磷酸二氢钠, 亚***钠, ***铝, 氢氧化钠均为分析纯。生理盐水,实验用水为三重蒸馏水。 动物昆明种小鼠(由学校动物中心提供)。 仪器 DZ-1BC 型真空干燥箱( 天津市泰斯特仪器有限责任公司) ;中药粉碎机( 浙江省温岭市大海药材器械厂); 电热恒温水槽( 上海精宏实验设备有限公司) ;循环水式真空泵( 巩义市英峪于华仪器厂); 756MC 紫外可见光分光光度计( 上海分析仪器总厂); GR-202 型分析天平( 1/10 万)( 日本); Heraeus 低温高速离心机( 德国)。 2 方法与结果 3 金莲花中总黄***的提取、纯化、含量测定称取已洗净干燥粉碎的金莲花 g, 60% 乙醇提取,提取两次,合并两次提取液, 过滤, 适当稀释, 石油醚萃取,经 D-101 大孔树脂纯化, 真空干燥成粉末即得金莲花总黄***。采用亚***钠- ***铝- 氢氧化钠比色法测定总黄***含量为 % 。 金莲花总黄***抗氧实验 清除超氧阴离子自由基( O2- ·) 的活性[3] 邻***在弱碱性 Tris-HCl 缓冲液() 溶液中自身氧化产生 O2- · ,随着反应进行 O2- · 在体系中不断积累,反应 3 min 后体系在 322 nm 处的吸光度值随时间变化呈量效增大, 而 O2- · 清除剂能使邻***自氧化产物在 322 nm 处吸收峰受抑制通过光化学方法测定 A 值,求抑制率。抑制率( %) =Acontrol-AsampleAcontrol × 100% 取6 支具塞试管,依次加入 pH 值 的 Tris-HCl ml ,三蒸水、总黄***,在 25℃水浴保温 20 min ,加入在 25 ℃水浴保温的邻***(用 10 mmol · L-1HCl 配置,浓度为 3 mmol · L-1) 后, 准确反