DNA超螺旋对肠产毒性大肠杆菌CFAI基因表达调节的分析.pdf

南开大学
硕士学位论文
DNA超螺旋对肠产毒性大肠杆菌CFA/I基因表达调节的研究
姓名:于春风
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:黄熙泰

譬:旦丛塑竖墼塞一要摘缙谖南妆砻鞅嗦隒/慕峁够騝产毒性大肠杆菌鐴ひ大的相似性。因此,对疘菌毛基因表达调控的研究对构建安全高效的多价疫苗以及对研究其它肠道菌和非肠道菌的致病机理都有重要意义。的正滴节作用。本实验通过菌落免疫酶斑和猙际醴⑾趾蠫的结构基因的大肠杆菌转化子在不存在明了疘的结构基因的表达还存在着除正调节子发现疘基因上游基因的转录与否,转录方向均对下游疘的结构基因的表达我们进一步探索了菪蕉訡/虻谋泶锏牡骺刈饔谩=ê陷型宿主中表达量普遍比负超螺旋水平相对较低的量有所提高。、通过氯喹啉~琼脂糖凝胶电泳分析,直接证明了蛉毕菪退拗骶械暮某菪揭8摺Q芯拷峁な担珼超螺旋水平是疘基因表达的另一调研究结果发现,由于疘上游基因的突变或重组造成了一株痌基因的高关键词:塑鐾产毒性大肠杆菌是引起婴幼儿和旅行者腹泻的主要病原菌,是危害发展中国家的重要病原菌之一。一般认为,首先依靠其表面定居菌毛,粘附︷膜上皮细胞,释放肠毒素,引起腹泻。痌菌毛是人致泻性大肠杆菌中发现的第一个与定居有关的菌毛,与其它定居菌毛无论在结构上,还是调节机制上都具有很的表达必须依赖调节基因虻牡骺叵乱材芄坏退奖泶铮獾钠渌骺鼗啤J笛有影响,暗示了上游基因的转录引起的局部菪谋浠赡苡跋霤/的表达。疘的结构基因的重组子重新转入负超螺旋水平相对要高的蛉毕菪退主中。菌落酶斑免疫检测发现疘基因在负超螺旋水平相对要高的蛉蛞吧退拗髦械谋泶有疘基因的质粒母撼菪奖认嘤蛞吧退拗骶械闹柿节机制。效表达株。疘基因基因表达调节菪贒,。\,『~玘,.
。.瑆疘.——瓻,,甀’甤瓺猚,,南开大学硕士学位论文.
旦型￡蔓堂塑型兰型望堡苎二———一一第一章前言一、和疘菌毛蛋白概况⋯,能够引起婴幼儿腹泻和旅游者腹泻。据统计,全球全年腹泻病人达亿左右,我国年发病约诙嗳舜危劳雎蚀锸蚍种现赜跋炝顺扇私】岛陀び锥⒂埃感染宿主后粘附锚定到小肠黏膜上皮细胞,抵御肠蠕动和粘液分泌,确保自身繁殖,并现的第一个与定居有关的菌毛,也是研究的最广泛的菌毛之一。疘蛋白的荒┒志贺氏菌毛哂邢嗨菩浴皁’”’”。⋯。因此作为的重要毒力因子,疘是作为最产毒性大肠杆菌叵,侵滦盒源蟪Ω司囊淮罄因此,是危害发展中国家人民健康的主要病原菌之一“闹饕V虏∫蜃樱一般认为有两类:肠毒素和定居因子毒素又分为热稳定毒素猻琒和热不稳定毒素。主要依靠表面菌毛,也叫定居因子抗原在相应位置释放肠毒素,引起腹泻”因此,定居因子菌毛是致病的先决条件。现己发现不同表面型、血清型的具有不同的菌毛抗原,并产生一定种类的肠毒素。与人类病原菌相关的几种菌毛抗原主要有:疘、疘//Ⅳ簟俊3鼵傻ヒ谎腔槌桑渌加啥嘌腔ノ蛔槌桑鏑/型菌毛由。亚基和騝Q腔槌删伞啊籆/途蒀亚基和。或。亚基组成““”5獵/是人大肠杆菌中发与其它型菌毛抗原存在很大同源性””⋯,其表达调节机制也与其它菌毛鏑/,有发展前途的遗传工程菌苗、多价疫苗的构成成分之一。ū泶锏幕虻骺的研究对构建安全高效的菌疫苗株,以及对研究其它肠道病原菌和非肠道细菌的致病机理都有重要意义。自从年状畏⑾諧性质、基因表达调控及其分布进行了大量研究,为本课题积累了丰富的背景知识。塑二童韭童。肠ǹ乖芯空呔投訡ǹ乖男翁,
甤/ǖ男翁徒峁固卣瓹/鞍椎囊糯技暗鹘鞍滓蜃拥ノ煌ü鼵末端的氨基酸之间疏水相互作用力连接而成的具有高级结构的聚合体“ぁ。疘蛋白因子是典型穿膜蛋白。中对其核甘酸和氨基酸序列已有详尽报道。、仁杷被幔灿霭被幔渲ナ鞘杷园被帷K淙挥白的氨基酸序列,发现其前体为霭被幔琋~末端前个氨基酸是信号肽,引导毛时被掩埋在高级结构中,与外界环境隔绝,从而逃避掉宿主细胞的防御体系。而另一部分氨基酸序列集中暴露在菌毛表面,与宿主细胞直接接触,形成一定的抗原决定簇,引发免疫应答。热嗽谝患督峁沟幕∩希捎眉扑慊际醴治隽薈/疏水性氨基酸与潜在的二级结构的关系,提出了可能的一级结构抗原决定簇:—、血清进行酶联免疫反应,部分验证了牟糠纸峁竦昧宋甯鱿咝缘腂一细胞决定簇,—,—,——鑍,为以后针对特定的抗原决定簇序列来疘结构基因簇等就发现编码疘蛋白和肠毒素的基因位于质粒。他们发现鞍椎牟枰V柿I系个区域的同时存在㈦挥薪饬礁区域克隆到相容性质粒上共同转入受体菌才会产生从年就有瓻,等多人在在电镜下观测到”“。完整的~骄本段.,呈长短不一棒状物。量,由大约鱿嗤腃年,捎娩寤韬兔噶呀夥ǚ治隽薈鞍椎囊患督峁棺琛3墒斓鞍子个氨基酸组成,分子量为摹┒宋猇,含有大量的个潜在的惶擒战岷衔坏悖涫导噬喜皇且桓鎏堑鞍住:罄从志繁ǖ懒薈鞍状┠ぁ鞍椎牟糠忠患督峁梗绕涫荂一端在组装成完整的、—、—”。年壤妹附饧