空肠弯曲菌peblA和cadF的克隆表达及多克隆抗体制备与纯化.pdf

靴做储獬汗引。馓学位论文作者签名中础糖┳众艉В拢H签字日期:玣辍拢谌签字日期:≤狮晔拢日学位论文独创性声明学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解直昌太堂有关保留、使用学位论文的规定,有权本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得直昌太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权直昌太堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所和中国学术期刊馀贪电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表,并通过网络向社会公众提供信息服务。C艿难宦畚脑诮饷芎笫视帽臼谌ㄊ导师签名中:学位论文独创性说明
空肠弯曲菌δ口校Α扮鄁且恢值贾氯死喾⑸毙猿ρ子胧澄摘要中毒的、危害仅次于沙门氏菌和志贺氏菌的人畜共患病原菌。建立空肠弯曲菌快速的检测方法,是有效预防和控制其疾病发生的重要手段。通常检测空肠弯曲菌的方法有分离培养方法、生化检测、免疫学检测、分子生物学方法等。免疫学快速筛查方法在病原微生物的检测中具有重要的应用价值,目前在空肠弯曲菌的快速检测方面,相关产品及技术甚少。获得针对空肠弯曲菌的特异性抗体,是建立空肠弯曲菌的免疫学快检方法的首要前提。为此,本文开展了以下研究。本文首先在大量文献调研的基础上,确定了空肠弯曲菌的外膜蛋白、作为特征性抗原。其编码的基因序列相对保守,且在不同的血清型空肠弯采用分子生物学的技术手段,本文成功克隆表达了蛋白,利用镍离子亲和柱纯化了表达产物。以和两种纯化蛋白免疫新西兰长耳兔,分别制备了相应的多克隆抗体,其效价分别为和本文利用斑点杂交的方法,发现抗血清与绿脓假单胞菌、金黄色葡萄球菌、保加利亚乳杆菌、福氏志贺菌等存在交叉反应,抗血清与普通变性杆菌、副溶血弧菌、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌和短双歧杆菌等存在交叉反应。为此,本文采用辛酸硫酸铵沉淀法,去除了血清中的杂蛋白。进一步采用磁珠法,消除了两种抗血清与上述微生物的交叉反应,获得了高纯度和高特异性的抗体。本文研究结果将为建立空肠弯曲菌的免疫学检测方法,奠定技术基础、提、关键词:空肠弯曲菌:;;多克隆抗体;斑点杂交;曲菌中均有表达,提示可作为检测抗原。虲街滞饽供实验材料。Ⅱ
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