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酶的特性实验
 (2009-10-14 08:55:58)
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杂谈
 
酶的特性实验
 
一、目的
    酶是生物催化剂,生物体内化学反应基本上都是在酶的催化下进行的。通过本实验了解酶催化的特异性以及pH、温度、抑制剂和激活剂对酶活力的影响,对于进一步掌握代谢反应及其调控机理具有十分重要的意义。
二、实验原理
    酶与一般催化剂最主要的区别之一是酶具有高度特异(专一)性,即一种酶只能对一种底物或一类底物(此类底物在结构上通常具有相同的化学键)起催化作用,对其他底物无催化反应。例如,淀粉酶和蔗糖酶虽然都是催化糖苷键的水解,但是淀粉酶只对淀粉起作用,蔗糖酶只水解蔗糖。还原糖产物可用班乃德试剂鉴定。
通过比较淀粉酶在不同pH、不同温度以及有无抑制剂或激活剂时水解淀粉的差异,说明这些环境因素与酶活性的关系。
唾液淀粉酶对淀粉的水解过程如下:
 
淀粉    蓝色糊精    红色糊精    无色糊精   麦芽糖
与碘反应:    蓝色     蓝紫色       红色       无色       无色
 
三、 试剂和器材
(一)、试剂
1、2%蔗糖溶液:用分析纯蔗糖新鲜配制。
2、%淀粉溶液
(二)、材料
(1) 唾液淀粉酶溶液:先用蒸馏水漱口,再含10ml左右蒸馏水,轻轻漱动,2分钟后吐出收集在烧杯中,纱布过滤,即得清澈的唾液淀粉酶原液,根据酶活高低稀释50倍,即为唾液淀粉酶溶液。
(2) 蔗糖酶溶液:取1g鲜酵母或干酵母放入研钵中,取蒸馏水12ml,分次加入,边加边研磨约10钟,用漏斗加滤纸过滤,滤液加2倍蒸馏水稀释。
(三)、仪器
恒温水浴(37℃)、沸水浴(100℃)、冰浴(0℃)、试管、吸管、2ml、5ml、量筒、比色板、胶头滴管等。
四、操作方法
(一)、酶催化的专一性
    取6支干净试管,按下表操作:
操作项目
管号
1
2
3
4
5
6
%淀粉(ml)
1
1
0
0
1
0
2%蔗糖(ml)
0
0
1
1
0
1
稀释唾液(ml)
1
0
1
0
0
0
蔗糖酶溶液(ml)
0
1
0
1
0
0
蒸馏水(ml)
0
0
0
0
1
1
酶促水解
摇匀,37℃水浴中保温10-15min
班乃德试剂(ml)
2
2
2
2
2
2
反应
摇匀,沸水浴中加热5~10min
结果(颜色)
   

 

 

 
(二)、温度对酶活力的影响
    取3支试管,按下表操作:
操作项目
管号
 1
   2
3
%淀粉溶液(ml)
 2
   2
2
稀释唾液(ml)
 1
   1
1
温度预处理5min(℃)
 0
    37
沸水浴
结果
 
 
       
 
摇匀,保持各自温度继续反应,5分钟后每隔1分钟从第2号管吸取1滴反应液于比色板上,用碘液检查反应进行情况,直至反应液不再变色(只有碘液的颜色),立即取出所有试管,流水冷却2min,向各管加入碘液2滴,混匀。观察并记录各管反应现象,解释之。 
 
(三)、pH对酶活力的影响
 取3支试管,按下