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上海博星基因芯片有限责任公司
博星实验室
(Laboratory of BioStar)


表达谱基因芯片实验操作流程

一、试剂
二、仪器与设备
三、总 RNA 提取
四、探针标记与杂交

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一、试剂
1. TRIzol 2. 异丙醇
3. 氯仿 4. 75% 乙醇(RNase-free)
5. Milli-Q 水(RNase-free) 6. 无水乙醇
7. dNTPs 8. Cy5-dCTP 和 Cy3-dCTP
9. 杂交试剂1 10. 标记试剂 I
11. 杂交试剂2 12. 标记试剂 II
13. 反转录酶 14. 标记试剂 III
15. 反转录引物 16. 洗片试剂1
17. 反转录酶缓冲液 18. 洗片试剂2
19. DTT 20. 洗片试剂3
∗试剂 7~20 为本公司芯片杂交试剂盒中的组分。



二、仪器与设备

1. 电动玻璃匀浆机 2. 电子天平
3. 低温高速离心机 4. 低温高速台式离心机
5. 超净工作台 6. 制冰机
7. 电热恒温水槽 8. 电泳槽
9. 电泳仪 10. 微波炉
11. 凝胶成像仪 12. 台式离心机
13. 核酸定量分析仪 14. 移液枪
15. 可调电炉 16. 旋涡混合器

-200 纯化柱


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三、总 RNA 提取
1) 将超低温保存的样品除去样品袋,在电子天平上称重后,转移至用液氮预冷的碾钵中,
用杵子碾磨组织,其间不断加入液氮,直至碾磨成粉末状。
2) 将碾磨成粉末状的样品,转移至已经加入适量 TRIzol 试剂的匀浆管中,把匀浆管置于冰
浴中,在组织匀浆粉碎机上进行匀浆。匀浆至匀浆液不粘且无颗粒即可。
3) 将匀浆液转移至 15 mL 离心管中, 于 4℃,12000 g,离心 10 min。
4) 小心吸取上清液转入新的 15 mL 离心管,在 15~30℃放置 5 min。
5) 向匀浆液中加入氯仿,盖紧离心管盖,用力震荡离心管,在 15~30℃放置 3 min。
6) 于 4℃,12000 g,离心 15 min。
7) 从离心机中小心地取出离心管,吸取上清至另一 15 mL 离心管。
8) 向上清加入异丙醇,轻轻颠倒离心管充分混匀液体,在 15~30℃放置 10 min。
9) 于 4℃,12000 g,离心 10 min。
10) 弃去上清,缓慢地沿管壁加入 75%乙醇 5 mL,轻轻颠倒洗涤离心管管壁,小心弃去乙醇。
11) 再加入 75%乙醇 10 mL,在涡旋器上短暂涡旋;于 4℃,8000 g 离心 10 min。
12) 小心弃上清,短暂离心,用移液枪吸去所有上清,在超净工作台中干燥沉淀 5 min。
13) 加入 RNase-free 的 Milli-Q