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水稻品种抗黑条矮缩病田间接种鉴定方法
本发明提供了一种水稻黑条矮缩病品种抗性的田间接种鉴定方法,农业科学【技术领域】。选取具备一定条件的田块作为鉴定圃,在特定时期播种不同水稻品种,麦收后鉴定圃内传毒介体灰飞虱具备一定的带毒率和虫口密度,待水稻生长至特定生育期后根据病害发生的严重程度评价水稻品种对水稻黑条矮缩病的抗性水平。利用本方法可以一次性对大量水稻品种进行抗黑条矮缩病鉴定,克服实验室人工鉴定规模较小、鉴定品种数较少的缺点。这一鉴定方法可以应用于筛选抗黑条矮缩病水稻品种、品种抗性评价、抗性品种选育和抗性遗传规律研究等众多领域。
【专利说明】水稻品种抗黑条矮缩病田间接种鉴定方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种水稻品种对黑条矮缩病抗性的田间鉴定方法,属于农业科学【技术领域】。
【背景技术】[0002]水稻黑条矮缩病是一种由水稻黑条矮缩病毒(Riceblack-streakeddwarfvirus,RBSDV)引起的病毒病,主要由灰飞虱以持久性不经卵方式进行传播。近年来,随着耕作制度和栽培方式的变化、冬季气候变暖和感病品种的大面积推广,传毒介体灰飞虱发生量日益上升,水稻黑条矮缩病在江苏、浙江、江西和福建大规模发生,并迅速上升为生产上最主要的病毒病害。据江苏省植保站统计,截止
2007年,病害已在该省沿海、淮北及里下河的盐城、连云港、泰州、淮安、扬州和徐州等地严重发生,,而2008年水稻黑条矮缩病的发生面积则超过400万亩,病害爆发、流行的形势非常严峻。
[0003]筛选抗病品种应用于生产是防治水稻黑条矮缩病最为直接有效的方法,至今为止还没有抗性品种在生产上应用。田间灰飞虱往往同时携带有条纹叶枯病的(Ricestripevirus,RSV)和RBSDV,但由于近年来抗条纹叶枯病品种的广泛推广,使得这一病害得到了有效遏制,因此,黑条矮缩病的田间鉴定结果不会受到RSV的干扰。另外,实验室人工鉴定步骤较为繁琐,鉴定空间也受到限制,不能进行大规模的品种鉴定,而资源筛选和抗性育种往往需要鉴定上千份水稻品种或品系,同时考察这些品种在田间的生长情况,这使得抗黑条矮缩病水稻资源的筛选和抗病育种工作受到极大的限制,迫切需要发明一种可以大规模进行水稻黑条矮缩病鉴定的田间鉴定方法,为水稻抗黑条矮缩病的资源发掘筛选、品种选育和遗传规律研究提供基本的研究手段。
【发明内容】
:
[0004]技术问题
[0005]本发明提供了一种水稻品种对水稻黑条矮缩病抗性的田间接种鉴定方法。
[0006]技术方案
[0007]—种水稻品种对水稻黑条矮缩病抗性的田间接种鉴定方法,其特征在于:
[0008]I)鉴定圃选择:
[0009]选择连续3年以上重发水稻黑条矮缩病的田块,且上年度感病对照品种在不防治条件下发病率大于40%,且麦收后鉴定圃内传毒介体灰飞虱带毒率高于4%,,最低为6XIO6头/hm2的田块作为鉴定圃,鉴定圃四周种植小麦作为灰飞虱寄养区,以保证获得足量虫源;
[0010]2)播栽方式
[0011]参加鉴定的品种种子,麦收前15-20天播种,每个待鉴定材料播150粒干种子,均匀撒播I行,行长50cm,行距IOcm;播种结束后田块浸水1_2天,除草剂封杀,出苗后正常管理,秧田期间不用药剂防虫;[0012]秧龄5-6叶时进行移栽,单苗栽插,行株距15cmX20cm,每个品种和家系栽插100穴,常规肥水管理,大田不施用任何农药,两次重复;
[0013]3)灰飞虱密度
[0014]麦收前后为灰飞虱从麦田迁移到鉴定圃的高发期,为了使鉴定圃内各个点的灰飞虱密度平均、一致,每天上午9点、下午4点用竹竿驱赶鉴定圃内的灰飞虱;
[0015]鉴定圃周围麦收后2-4天调查灰飞虱密度:对整个鉴定圃采用对角线法5点取样,;用水湿润长方形35cmX50cm白搪瓷盘内壁,对准水稻秧苗中下部,连拍三下,每次拍查计数后清洗白搪瓷盘,进行下次拍查;
[0016]4)灰飞虱带毒率检测
[0017]于鉴定圃周围麦收后2-4天,捕捉灰飞虱500头以上,随机选取100头,按照SN/T1666-2005检测灰飞虱群体带毒情况,计算灰飞虱群体的带毒率;
[0018]5)有效接种的灰飞虱密度和带毒率要求
[0019]有效接种的灰飞虱密度和带毒率关系按公式(I)计算:
[0021]式中:
[0022]D——有效接种的灰飞虱密度,单位为头每公顷(头/hm2);
[0023]PVS——灰飞虱带毒率,单位为百分率(%);
[0024],当灰飞虱带毒率达到100%时根据公式(I)可知,鉴定圃中灰飞風密度最低为6XIO6头/hm2;
[0025]鉴定圃中灰飞虱带毒率不低于4%;
[0026]6)管理
[0027]鉴定圃及其周围IOm范围内田块不使用任何杀虫剂和防治病毒药剂,麦收后不焚烧秸杆;田间肥料运筹、灌溉水管理与常规生产一致,不使用任何杀虫剂和防治病毒药剂;
[0028]7)调查时期
[0029]鉴定圃中秧苗移栽后生长至分蘖高峰期时进行病情调查,江苏苏北地区在I月下旬;
[0030]8)调查方法
[0031]鉴定圃中秧苗移栽后长至分蘖高峰期时统计发病率:
[0032]此时发病植株表现出明显的病状:稻株严重矮缩不及正常株高的1/3、心叶突破下叶叶鞘而出、部分植株表现为从下叶枕口呈螺旋状伸出、部分叶片的顶端出现旋状卷曲;
[0033]而健康稻株表现株高正常,分蘖旺盛,生命力强;以每个试验点2个重复的发病百分率平均值作为品种抗黑条矮缩病表型值进行统计;
[0034]9)水稻黑条矮缩病抗性级别的划分:
[0035]免疫:发病率为0;
[0036]高抗:发病率0-5%;
[0037]抗病:发病率5%-10%;
[0038]中抗:发病率11-20%;
[0039]感病:发病率20%_50%;[0040]高感:发病率高于50%。
[0041]有益效果
[0042]本方法可以一次性对大量水稻品种进行抗黑条矮缩病鉴定,克服实验室人工鉴定规模较小、鉴定品种数较少的缺点。这一鉴定方法可以应用于筛选抗黑条矮缩病水稻品种、品种抗性评价、抗性品种选育和抗性遗传规律研究等众多领域。
[0043]本发明方法已用于1000多个水稻品种黑条矮缩病抗性鉴定,部分品种鉴定结果如表3所示。
【专利附图】
【附图说明】
[0044]图1水稻分蘖高峰期黑条矮缩病特征
[0045]A:黑条矮缩病毒侵染后的发病植株B:黑条矮缩病毒侵染后的发病家系
[0046]具体实施方法
[0047](一)一次性对大量水稻品种进行抗黑条矮缩病鉴定
[0048]1、鉴定圃选择
[0049]选择连续3年以上重发水稻黑条矮缩病的田块,且上年度感病对照品种在不防治条件下发病率大于40%作为鉴定圃,鉴定圃四周种植小麦作为灰飞虱寄养区,以保证获得足量虫源。
[0050]2、播栽方式`
[0051]参加鉴定的品种种子(含抗病对照和感病对照品种),麦收前15-20天播种,每个待鉴定材料播150粒干种子,均匀撒播I行,行长50cm,行距10cm。播种结束后田块浸水1_2天,出苗后正常管理,秧田期间不用药剂防虫。
[0052]秧龄5-6叶时进行移栽,单苗栽插,行株距15cmX20cm,每个品种和家系栽插100穴。常规肥水管理,大田不施用任何农药。两次重复。
[0053]3、灰飞虱密度及带毒率调查
[0054]I)灰飞虱密度调查
[0055]麦收前后为灰飞虱从麦田迁移到鉴定圃的高发期,为了使鉴定圃内各个点的灰飞虱密度平均、一致,每天上午9点、下午4点用竹竿驱赶鉴定圃内的灰飞虱。
[0056]鉴定圃周围麦收后2-4天,鉴定圃内灰飞風密度达到最大,因此选择这个时期是调查灰飞虱密度的最佳时机。对整个鉴定圃采用对角线法5点取样,(;用水湿润长方形(35cmX50cm)白搪瓷盘内壁,对准水稻秧苗中下部,连拍三下,每次拍查计数后清洗白搪瓷盘,进行下次拍查。
[0057]2)灰飞虱带毒率检测
[0058]于鉴定圃周围麦收后2-4天,捕捉灰飞虱500头以上,随机选取100头,按照SN/T1666-2005检测灰飞虱群体带毒情况,计算灰飞虱群体的带毒率。
[0059]4、有效接种的灰飞虱密度和带毒率要求
[0060]有效接种的灰飞虱密度和带毒率关系按公式(I)计算:
[0061]D=6X106/PVS......................................................(I)
[0062]式中:
[0063]D——有效接种的灰飞虱密度,单位为头每公顷(头/hm2);[0064]PVS——灰飞虱带毒率,单位为百分率(%)。
[0065]根据鉴定圃的播种量及播种株距和行距,每公顷鉴定圃苗数约为3XIO7株,每株秧苗虫量乘以灰飞虱带毒率接近I时才能达到接种要求,设定每头灰飞虱在田间不同植株间可以传毒5次,因此有效接种的灰飞虱密度和带毒率关系为D=(3X107+5)/PVS,即为公式(I)。
[0066]I)有效接种的灰飞虱密度要求
[0067],秧苗受虫害较重,出现大量死苗,。当灰飞虱带毒率达到100%时根据公式(I)可知,鉴定圃中灰飞風密度最低为6XIO6头/hm2。
[0068]2)有效接种的灰飞虱带毒率要求
[0069],在这种条件下,根据公式(I)计算,鉴定圃中灰飞虱带毒率不低于4%。
[0070]5、鉴定圃寄养区管理
[0071]鉴定圃及其周围IOm范围内田块不使用任何杀虫剂和防治病毒药剂,麦收后不焚烧稻杆。
[0072]6、调查时期
[0073]鉴定圃中秧苗移栽后生长至分蘖高峰期时进行病情调查,江苏苏北地区通常在7月下旬。
[0074]7、调查方法
[0075]鉴定圃中秧苗移栽后长至分蘖高峰期时统计发病率。此时发病植株表现出明显的病状(参考文献:刘万才等,警惕南方水稻黑条矮缩病暴发造成严重危害,《中国植保导刊》,2010,30(3):17-18.):
[0076]稻株严重矮缩不及正常株高的1/3、心叶突破下叶叶鞘而出、部分植株表现为从下叶枕口呈螺旋状伸出、部分叶片的顶端出现旋状卷曲;
[0077]而健康稻株表现株高正常,分蘖旺盛,生命力强(图1)。另外,此时的发病植株很少有中间型病状,以每个试验点2个重复的发病百分率平均值作为品种抗黑条矮缩病表型值进行统计。
[0078]8、田间肥水管理
[0079]田间肥料运筹、灌溉水管理与常规生产一致,不使用任何杀虫剂和防治病毒药剂。
[0080]9、水稻黑条矮缩病抗性级别的划分:
[0081]免疫:发病率为0;闻抗:发病率0-5%;抗:发病率5%_10%;中抗:发病率11-20%;感病:发病率高于20%,高感。
[0082](二)有效接种的灰飞虱密度和带毒率要求实验依据
[0083]在带毒率3%、5%和8%条件下,接虫量从600万头/亩上升至800万头/亩时,高感水稻黑条矮缩病品种武育粳3号发病率上升幅度最大,分别为15%、10%和16%;接虫量从
800万头/亩上升至1000万头/亩时,武育粳3号死苗率上升幅度最大,分别为13%、12%和18%(表2)。另外,在灰飞虱虫量为800万头/亩条件下,灰飞虱带毒率为3%时,武育粳3号发病率为26%,发病较轻;而带毒率分别为5%和8%时,发病率达到了48%和64%,所以带毒率应不低于5%。[0084]表1虫量、带毒率、发病率和死苗率之间的关系
【权利要求】
,其特征在于:I)鉴定圃选择:选择连续3年以上重发水稻黑条矮缩病的田块,且上年度感病对照品种在不防治条件下发病率大于40%,且麦收后鉴定圃内传毒介体灰飞虱带毒率高于4%,,最低为6XIO6头/hm2的田块作为鉴定圃,鉴定圃四周种植小麦作为灰飞虱寄养区,以保证获得足量虫源;2)播栽方式参加鉴定的品种种子,麦收前15-20天播种,每个待鉴定材料播150粒干种子,均匀撒播I行,行长50cm,行距IOcm;播种结束后田块浸水1_2天,出苗后正常管理,秧田期间不用药剂防虫;秧龄5-6叶时进行移栽,单苗栽插,行株距15cmX20cm,每个品种和家系栽插100穴,常规肥水管理,大田不施用任何农药,两次重复;3)灰飞虱密度麦收前后为灰飞虱从麦田迁移到鉴定圃的高发期,为了使鉴定圃内各个点的灰飞虱密度平均、一致,每天上午9点、下午4点用竹竿驱赶鉴定圃内的灰飞虱;