纳他霉素发酵生产实验报告.doc

纳他霉素的发酵生产、分离纯化及检测

(广州大学生物工程系,广州510006 )
摘要:本实验利用褐黄孢链霉菌斜面菌种,先取约5个接种环的斜面菌种无菌接种到2瓶种子液体培养基中培养24小时,再分别在无菌条件下用移液枪吸取1mL种子培养基转接到6瓶发酵培养基,摇瓶发酵48小时后,连续3天吸取菌液进行镜检,菌液OD值测定,并利用500μg/mL的纳他霉素按照0mL,,,,,;摇瓶发酵5天后,合并发酵液,离心获得菌泥,采用2倍菌泥体积的95%酒精,pH值在10~;离心保留上清液,,冰箱静置3h,纳他霉素在等电点析出;离心,保留产物;产物在55℃真空干燥2h,。
关键词:褐黄孢链霉菌;种子培养基;发酵培养基;等电点溶解;真空干燥
引言:纳他霉素是一种多烯烃大环内酯类抗真菌剂, 其分子是一种具有活性的环状四烯化合物,含3个以上的结晶水,其外观白色(或奶油色),为无色、无味的结晶粉末,分子式C33H47NO13,。微溶于水、甲醇,溶于稀酸、冰醋酸及二甲苯甲酰***,难溶于大部分有机溶剂。在pH值高于9或低于3时,其溶解度会有所提高。纳他霉素具有一定的抗热处理能力,在干燥状态下相对稳定,能耐受短暂高温(100℃);但由于它具有环状化学结构、对紫外线较为敏感,故不宜与阳光接触。纳他霉素活性的稳定性受PH值、温度、光照强度和氧化剂及重金属的影响,所以产品应该避免与氧化物及硫氢化合物等接触[http://baike./view/]。
纳他霉素( Natamycin) 是由一种纳塔尔链霉菌( St rep tomy ces natal ensi s ) 发酵产生的一种二十六元多烯大环内酯类抗生素, 能有效地抑制和杀死霉菌及酵母菌,是一种安全、低毒、高效、广谱的抗真菌抗生素和天然的生物防腐剂[ 1]与其它抗菌产品相比,纳他霉素对哺乳动物细胞的毒性极低, ,纳他霉素的低溶解度,可用其对食品表面进行处理以增加食品的保质期, ,全球有 30 多个国家批准将纳他霉素用于乳制品、肉制品、果汁饮料、葡萄酒等的生产和保藏[ 2]。纳他霉素的需求量增加, 市场前景巨大。
纳他霉素主要由恰塔努加链霉菌(S trep tomy cescha t tanovg ensis)、纳塔尔链霉菌(S trep tomy ces na tu2lonso)和褐黄孢链霉菌(S trep tomy ces g ilvosp oreus)产生。
在发酵过程中,培养液中各成分的浓度和类型都会影响纳他霉素的生物合成,其中碳氮比是最关键的因素之一,氮源促进菌体的生长繁殖,同时要在发酵中流加补充适当的碳源。纳他霉素在以葡萄糖最为碳源时产量最高[ 3]。因为葡萄糖能够渗入纳他霉素分子之中[ 3]。氮源类型对纳他霉素的产量有较大的影响。有资料表明,菌体细胞生长最好的氮源是酵母提取物,而纳他霉素产生的最佳氮源为牛肉浸出物[ 3]。

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:褐黄孢链霉菌
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孢子斜面培养基:酵母提取粉4g/L,麦芽提取粉1