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滤膜法测定粪大肠菌群.doc
文档介绍:
滤膜法测定粪大肠菌群
37.1.1 主题内容与适用范围
本方法规定了生活饮用水中粪大肠菌群的滤膜测定方法。本方法适用于生活饮用水和低浊度的水源水中粪大肠菌群数的测定。
37.1.2 方法提要
用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤水样,细菌被截留在滤膜上,将滤膜贴在MFC培养基上,经44.5℃培养后,计数典型菌落。 37.1.3 培养基与试剂
37.1.3.1 MFC培养基
37.1.3.1.1 成份
A 胰胨 10g
B 多胨 5g
C 酵母浸膏 3g
D ***化钠 5g
E 乳糖 12.5g
F 胆盐3号(Bile salt No.3)
或混合胆盐 1.5g
G 琼脂 15g
H 苯***蓝 0.2g
I 蒸馏水 1000mL
37.1.3.1.2 制法: 在1000mL蒸馏水中先加入玫红酸(10g/L)的氢氧化钠
溶液[C(NaOH)=0.2mol/L] 10mL,混合后,取500mL加入琼脂煮沸溶解,于另外500mL 蒸馏水中,加入除苯***蓝以外的其他试剂,加热溶解,倒入已溶解的琼脂,混匀后调pH为7.4,加入苯***蓝煮沸,迅速离开热源,待冷却至60℃左右,制成平板, 不可高压灭菌。
制好的培养基应存放于2~10℃,不超过96h。
本培养基也可不加琼脂,制成液体培养基,使用时加2mL于灭菌吸收垫上, 再将滤膜置于培养垫上培养。
37.1.3.2 EC培养基
37.1.3.2.1 成份
A 胰蛋白胨 20g
B 乳糖 5g
37.1.1 主题内容与适用范围
本方法规定了生活饮用水中粪大肠菌群的滤膜测定方法。本方法适用于生活饮用水和低浊度的水源水中粪大肠菌群数的测定。
37.1.2 方法提要
用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤水样,细菌被截留在滤膜上,将滤膜贴在MFC培养基上,经44.5℃培养后,计数典型菌落。 37.1.3 培养基与试剂
37.1.3.1 MFC培养基
37.1.3.1.1 成份
A 胰胨 10g
B 多胨 5g
C 酵母浸膏 3g
D ***化钠 5g
E 乳糖 12.5g
F 胆盐3号(Bile salt No.3)
或混合胆盐 1.5g
G 琼脂 15g
H 苯***蓝 0.2g
I 蒸馏水 1000mL
37.1.3.1.2 制法: 在1000mL蒸馏水中先加入玫红酸(10g/L)的氢氧化钠溶液[C(NaOH)=0.2mol/L] 10mL,混合后,取500mL加入琼脂煮沸溶解,于另外500mL 蒸馏水中,加入除苯***蓝以外的其他试剂,加热溶解,倒入已溶解的琼脂,混匀后调pH为7.4,加入苯***蓝煮沸,迅速离开热源,待冷却至60℃左右,制成平板, 不可高压灭菌。
制好的培养基应存放于2~10℃,不超过96h。
本培养基也可不加琼脂,制成液体培养基,使用时加2mL于灭菌吸收垫上, 再将滤膜置于培养垫上培养。
37.1.3.2 EC培养基
37.1.3.2.1 成份
A 胰蛋白胨 20g
B 乳糖 5g
C 3号胆盐或混合胆盐 1.5g
D 磷酸氢二钾 4g
E 磷酸二氢钾 1.5g
F ***化钠 5g
G 蒸馏水 1000mL
37.1.3.2.2 制法: 将上述成份溶解于蒸馏水中, 分装到带有倒管的试管中, 115℃高压灭菌20min,最终pH为6.9±0.2。
37.1.4 仪器
37.1.4.1 隔水式恒温培养箱或恒温水浴。
37.1.4.2 塑料培养皿: 60mm×15mm或50mm×12mm。 37.1.4.3 其他仪器同总大肠菌群滤膜法(36.1.4)。
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