谈体外诱导小鼠胚胎干细胞分化为造血干细胞.pdf

洳≥:�ò怠�硕士学位论文�佳处透昱尘�笸⒘惩跏�张杷颗淘煊阃跸赴�论文题目���塑照生塑堂生佥叠堂堂堕提交日期学科�ㄒ�所在学院����
致谢本论文是在我的导师赵小立老师的悉心指导下完成的。在浙大读研究生的两年来,导师渊博的学识,谦虚宽容的品格,踏实敬业的精神让我十分钦佩,尤其是导师在科学道路上的创新进取、严谨理智的风格更是深深的影响了我。在我的实验进行的过程中,导师自始至终都进行了热情地关怀,从实验思路、实验材料的准备、实验进行包括结果总结以及文章的写作每一个环节都进行了认真地指导,并在给出了中肯意见的同时,也给了我广阔的发挥空间,我所取得每一点进步都凝集了导师的心血和汗水。导师两年来对我的辛勤栽培以及给对我产生的潜移默化的影响将使我受益终身,为我今后的人生道路指引了正确的方向,在此向我的导师致以最诚挚的感谢和祝愿�感谢张铭教授在试验过程中提供的大力支持和无私的经验传授以及经常的提醒。感谢杜英老师在实验设备的使用和实验耗材上提供的帮助,尤其是指导我学会了使用荧光显微镜。感谢我的师姐吴娟莉,感谢她在这两年的时间里对我学习上的指导和实验上经验传授,以及生活上的照顾,令我能够在进校初很快适应了研究生的生活,并且顺利完成本论文。非常感谢师弟陈小攀对我实验上的大力帮助,在他帮助下,我的实验在后期才得以顺利展开。同时感谢实验室其他同学包括王挺、苏忠渊、吴蓉蓉、刘玉侃、黄华荣、余宏等同学,他们在我实验上遇到困难和难题时给予了的热心帮助和解答,使我受益匪浅,顺利地完成实验。最后感谢我的父母和朋友,是他们无私的关怀和爱一直鼓励着我向前进步。再次衷心所有帮助过和支持我的人,我会永远将他们铭记于心,在人生的道路上努力进取,奋发向上,为国家的发展尽自己的一份力量�卢霞��年��第�彻���
摘要胚胎干细胞��������珽��是由哺乳动物囊胚的内细胞团��,��或原始生殖细胞���������琍��分离出来的,能够在体外保持未分化的状态,并能进行高度增殖的多潜能细胞。它用途广泛,其中,诱导胚胎干细胞向各种功能细胞如血细胞、神经细胞、肌细胞、肝细胞、骨细胞等细胞的分化是目前的研究热点之一。通过部分基因被选择性的激活或者差异性表达,控制专一性蛋白质的合成和排布,从而获得特定的细胞。获得的功能细胞可以应用于细胞疗法,治疗神经系统疾病�缗两鹕��,免疫系统的疾病�绨�滩�,造血系统疾病�绨籽2�,心血管系统疾病�缧募」�塞�约案髦侄裥灾琢�如肝癌�鹊取�造血干细胞作为最原始的造血于细胞,是临床应用和基础研究的优良材料之一,它是当前应用于细胞疗法最多的一类细胞,当把它注射到患有白血病、再生障碍性贫血、重症免疫缺陷症、地中海贫血、急性放射病、恶性实体瘤或者淋巴瘤等造血及免疫系统功能障碍性疾病的患者体内,它能够发挥功能,重建患者体内的造血系统和免疫系统,从而达到治疗的目的,它是当前治疗恶性血液疾病和免疫疾病的最佳手段。但是在实际应用中,造血干细胞的分离方法复杂,含量很稀少,而且来源于体内的造血干细胞在体外增殖能力有限,因此利用胚胎干细胞分化为造血干细胞,可以获得大量长期增殖的多潜能的造血干细胞,从而解决临床应用和基础研究中造血干细胞材料不足的难题。目前国际上常用的诱导方法有两种:一是采用���氏赴�肱咛ジ上赴�共培养;二是将胚胎干细胞先分化为拟胚体,然后添加一些外源细胞因子的组合,如���、��、�一�����—���.����等等,来诱导胚胎干细胞向造血于细胞。虽然这两种方法在诱导胚胎干细胞向造血干细胞分化取得了很大的成效,但是仍然存在着一些难以克服的局限性:①���氏赴�醋杂��狢�基因缺陷的小鼠,所以难以得到人的“��毕赴��硪环矫妫�A税踩�性着想,研究人胚胎干细胞向造血干细胞分化时,不应当使用小鼠来源的��基质细胞与之共培养。所以但是长远看来,�/��才嘌�盏继逑涤凶牌淠岩�克服的局限性。②使用多种细胞因子混合作用,可以明确的显示各种细胞因子的�������第�彻���
作用,但是它们分离复杂,导致价格昂贵,在研究中尚可以接受,临床上使用时会增加病人的负担,不能大量推广。本实验在阅读大量文献基础上,发现成骨细胞是造血微环境中的重要成员,它不仅可以分泌刺激造血的因子,如�瓹�、�瓹�、�����、��,等等,而且还易于分离培养,可以方便地获得人成骨细胞,从而解决了异种污染人细胞的危险。推理成骨细胞与胚胎干细胞共培养是一种理想的诱导方法。试验中将小鼠成骨细胞系���籈�胄∈笈咛ジ上赴�才嘌��挥刑砑尤魏蜗赴�蜃樱��用成骨细胞分泌的因子,以及细胞与细胞间的相互作用,来进行诱导,探索成骨细胞在促进造血分化上的作用。通过分析基因表达,观察细胞形态,免疫荧光反应等分析手段,来鉴定所获细胞的性质,前期试验证明了这一方法的可行性。与国内外已有的方法如���氏