氨基酸的薄层层析实验报告.doc

生物化学实验报告
姓名: XXXXX

学号: XXXXXXXXXXXXXX

专业年级: XXXXXXXXXXXXXXX

组别: 第X实验室
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称
氨基酸的薄层层析
实验日期
XXXX-XX-XX
实验地点
第X实验室
合作者
XXXX
指导老师
XXX
评分

教师签名

批改日期

一、实验目的
1、掌握薄层层析法的实验原理。
2、掌握氨基酸薄层层析法的基本操作方法。
3、掌握如何根据移动速率(Rf值)来鉴定被分离的物质(即氨基酸混合液)的方法。
二、实验原理
1、薄层层析法是色谱分析技术的一种。
是将吸附剂、载体或其他活性物质均匀涂铺在平面板(如玻璃板、塑料片、金属片等)上,形成薄层()后,在此薄层上进行层析分离的分析方法。
一般是将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。当液相(展开溶剂)在固定相上流动时,由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样,不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样,点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同,因而可以彼此分开。(即通过吸附-解吸-再吸附-再解吸的反复进行,而将样品各组分分离开来)
硅胶吸附薄层层析:
吸附薄层中常用的吸附剂为氧化铝和硅胶。硅胶:表达式为SiO2·XH2O。层析用硅胶是一种多孔性物质,它的硅氧环交链结构表面上密布极性硅醇基(-Si-OH),这种极性的硅醇基能和许多化合物形成氢键而产生吸附.
硅胶吸附薄层层析的特点:
硅胶的吸附能力比氧化铝稍弱,其吸附活性也与含水量呈负性相关。
②硅醇基显较弱的酸性,因此,硅胶只能用于中性、或酸性成分的分离,碱性成分不能用它分离。
③硅胶的活化温度通常为105℃-110℃,不能过高。
2、氨基酸与茚三***的显色反应:
茚三***水化后生成水化茚三***,它与氨基酸的羧基反应生成还原茚三***、氨及醛,与此同时,还原茚三***又与氨及茚三***缩合生成紫红化合物而使氨基酸斑点显色。
3、混合氨基酸被分离后在薄层层析图谱上的位置用相对迁移率—Rf值(rate of flow)来表示。
层析中,物质沿溶剂运动方向迁移的距离与溶液前沿的距离之比为Rf值。
即:
=
由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的,故移动速率(Rf值)也是恒定的,因此可以根据Rf值来鉴定被分离的物质。
三、材料与方法:
(一)、材料:分析样品(氨基酸混合液)、吸附剂(硅胶)、粘合剂(%的羧***纤维素钠)、氨基酸的异丙醇溶液(丙氨酸、精氨酸、甘氨酸)、展开-显色剂(正丁醇、乙酸、水、茚三***溶液);
(二)、器材:层析板(5cm×15cm)、尺子、铅笔、小烧杯、玻棒、量筒(10ml)、吹风机、毛细玻璃管、层析缸、药匙、烘箱;
(三)、方法:
制版
点样
层析
显色
处理与结果分析
1、实验流程:
2、操作步骤:
调浆:称取硅胶3克,%的羧***纤维素钠8毫升,调成均匀的糊状。
(1)薄层板的制备:
涂布:取洁净的干燥玻璃板均匀涂层。


干燥:将玻璃板水平放置,室温下自然凉干。
活化:70℃烘干30分钟。切断电源,待玻璃板面温度下降至不烫手时取出。

标记:用铅笔距底边2cm水平