C57BL_6J小鼠胚胎干细胞的α-GT基因敲除.pdf

第三军医大学
博士学位论文
C57BL/6J小鼠胚胎干细胞的α-GT基因敲除
姓名:张伟
申请学位级别:博士
专业:人体解剖与组织胚胎学
指导教师:应大君
20040501
芝鱼互丝生强伟第三军医大学研究生学位论文独创性声明兰:兰:第三军医大学研究生学位论文版权使用授权书论文作者签名:指导教师签名:期:日期:导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别秉承学校严谨的校风和科研作风,本人申明所呈交的论文是我本人在加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担一切相关责任。权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查并表示谢意。本人完全了解第三军医大学有关保护知识产权的规定,即:研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属第三军医大学。本人保证毕业离校后,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为第三军医大学。学校有阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容C苣谌莩,可以采用影印、缩印或其他手段保存论文。日
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∈笈咛ジ上赴腝—基因敲除摘要的最大障碍是供器官异种抗原与受者体内天然抗体结合后激活补体系统,攻击供器官的几分钟至数小时,供器官在短时间内发生功能衰竭使移植失败。已有的资料显示异的主要靶抗原。瓽是细胞表面分泌型糖蛋白的聚乳糖胺核心的一个末端残基,广和神经组织中异种抗原狦的表达很少或没有。狦的代谢受猯,。正常人不具有这种抗原,但人血清中存异种细胞移植是近年来新兴的一个研究领域。尽管同种细胞移植在恢复细胞功能,替代治疗以及提高受损脏器功能方面的疗效已经得以证实。但是存在几方面的缺点使其应用受到限制:死嗟南赴鱿赴浦玻淅丛词艿较拗疲检测新鲜分离的细胞质量和经过基因修饰的细胞安全性方面存在很多困难;ü哂卸喾只能的人胚胎干细胞分化为一些细胞前体,存在大量的伦理学和技术方面的问题。因此,针对细胞移植直接有效的调整动物细胞将是开展细胞移植的一条有价值的途径。同异种器官移植比较,异种细胞移植更容易应用于临床治疗,其优越性主要表现在:能够在体外大量培养、纯化,并且在移植前可以进行细胞质量的鉴定;浦蚕赴反应,一般认为异种细胞移植的排斥反应机制以细胞免疫为主。但最近的文献显示体液免疫也参与了排斥反应。狦作为异种细胞表面最主要的靶抗原,对狦的研随着小鼠胚胎于细胞系统和胚胎重建技术的日益完善,基因敲除技术在几乎所有生物学领域得以广泛的应用,已经成为蛋白质组学和功能基因组学研究中的一个重要工具。应用基因敲除技术已经得到相当多的动物/细胞模型和疾病模型。异种器官移植是解决器官移植中供器官严重缺乏的潜在途径之一。异种器官移植而产生的超急性免疫排斥反应琀浞⑸奔湓谝熘忠浦埠种抗原话肴樘腔乖,狦且熘忠浦渤毙悦庖吲懦夥从χ泛存在于猪和其它低等动物体内,尤其在内皮细胞中表达最丰富。在骨,软骨,肌肉移酶在高滴度的抗狦抗体,因此在异种器官移植中会导致发生。不代表异种血管化器官移植中的严重免疫学问题。异种细胞移植中仍存在有免疫排斥究将为解决异种细胞移植免疫排斥反应提供资料,并为异种器官移植提供佐证。为了建立瓽蚯贸∈蟮募际跗教ǎ臼笛楣鄄炝薈小鼠胚胎干细胞表第三军医大学博士学位论文
⒗弥参锬谺胍熘挚乖蛞籊特异亲和的特性,通过亲和组织化和细胞浆中存在大量的异种抗原,细胞核未发现有表达。提示在异种胚胎干细胞移植中需要注意异种抗原狦带来的体液免疫问题。⑼üぞ嗬隤从∈蠡蜃镈中克隆出同源长臂.,同源短载体狦.,同源序列全长共约,经测序鉴定,酶切鉴定和定打靶载体中安装的序列正确。使用这一方法构建基因打靶载体与从基因组文库中