实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法.doc

《生物化学》实验指导书
适用专业:生物科学、食品科学、生物工程、农学、园艺、环境科学
孝感学院生命科学与技术学院
生物化学实验细则
为了保证生物化学实验的顺利进行, 培养同学们掌握良好、规范的生物化学基本实验技能, 特制定以下实验细则,请同学们严格遵守。
1. 实验前应提前预****实验指导书并复****相关知识。
2. 严格按照生物化学实验分组,分批进入实验室,不得迟到。非本实验组的同学不准进入实验室。
3. 进入实验室必须穿实验服。各位同学进入各自实验小组实验台后,保持安静,不得大声喧哗和嬉戏,不得无故离开本实验台随便走动。绝对禁止用实验仪器或药物嬉耍。
4. 实验中应保持实验台的整洁,废液倒入废液桶中,用过的滤纸放入垃圾桶中,禁止直接倒入水槽中或随地乱丢。
5. 实验中要注意节约药品与试剂,爱护仪器,使用前应了解使用方法,使用时要严格遵守操作规程,不得擅自移动实验仪器。否则,因非实验性损坏,由损坏者赔还。
6. 使用水、火、电时,要做到人在使用,人走关水、断电、熄火。
7. 做完实验要清洗仪器、器皿,并放回原位,擦净桌面。
8. 实验后,要及时完成实验报告。
目录
实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法...............................1
实验二油脂酸价的测定............................................................5
实验三蛋白质的提取及浓度测定¬(紫外吸收法)........................................7
实验四淀粉酶活力的测定...........................................................9
实验五酶的激活和抑制作用......................................................13
实验六氨基酸的分离鉴定――纸层析法............................................14
实验七基因组DNA的快速提取---碘化钾法........................................16
实验八琼脂糖凝胶电泳技术――DNA样品检测.....................................18
实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法
一、目的与要求
掌握还原糖和总糖测定的基本原理,学****比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、实验原理
还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或***基的糖类,单糖都是还原糖,双糖和多糖不一定是还原糖,其中乳糖和麦芽糖是还原糖,蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同,可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来,对没有还原性的双糖和多糖,可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定,再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量计)。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物,3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内,还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系,利用分光光度计,在540nm波长下测定光密度值,查对标准曲线并计算,便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时,每断裂一个糖苷键需加入一分子水,。
三、实验材料、主要仪器和试剂

小麦面粉(1000 g)

(1)具塞玻璃刻度试管:20 mL×11 (2) 滤纸(3)烧杯:100 mL×2
(4)三角瓶:100 mL×1 (5)容量瓶:100 mL×3 (6)刻度吸管:1mL×1;2 mL×2;10 mL×1 (7)恒温水浴锅(8)煤气炉(9)漏斗(10)天平(11)分光光度计
3. 试剂
(1)1mg/mL葡萄糖标准液
准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100 mg,置于小烧杯中,加少量蒸馏水溶解后,转移到100 mL容量瓶中,用蒸馏水定容至100 mL,混匀,4℃冰箱中保存备用。
(2)3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂
3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂: g DNS溶于少量热蒸馏水中,溶解后移入1000 mL容量瓶中,加入2 mol/L氢氧化钠溶液325 mL,再加入45 g丙三醇,摇匀,冷却后定容至1000 mL。。
(3)碘-碘化钾溶液:称取5 g碘和10 g碘化钾,溶于100 mL蒸馏水中。
(4)酚酞指示剂: g酚酞,溶于250 mL 70%乙醇中。
(5)