精品论文-小鼠间充质祖细胞体外优化培养及向神经元样细胞定向诱导分化的实验研究.pdf

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小鼠间充质祖细胞体外优化培养及向神经元样细胞定向诱导分化的实验研究摘要方法:目的:对体外培养∈竺苤使抢丛吹募涑渲首嫦赴琈姆椒ń醒芯浚⑹屎闲鼠鲋车呐嘌桨福惶教中∈竺苤使抢丛吹腗体外向神经元取材方法选择健康菩孕∈螅褰嗉叮周龄,股骨、胫骨碎片经型胶原蛋白酶消化后作为丛础分组取得消化后的骨碎片,选取干细胞培养中经常使用的/嘌嘌⑽椋甅培养基和旧的胎牛血清公司生产的胎牛血清,按不同搭配进行培养,随机分为/%ヅQG遄椤疐胎牛血清组、胎牛血清组、胎牛血清组、—%ヅQG遄椤⒔觯甅胎牛血清组,共椋孔榕嘌份。样细胞定向诱导分化的实验研究。重庆医科大学硕士研究生学位论文鹣钅浚贺壹抑氐慊⊙芯糠⒄构婊钅”项目现嘏偕司戎斡胨鹕俗橹腋吹幕⊙芯
ㄏ蛴盏汲缮窬Q赴姆椒ㄈ∮呕桨概嘌腜培养方法将小鼠密质骨碎片置入六孔板中,按不同分组加入相应培养液,放入℃、的培养箱内,笫状位灰海院竺灰阂淮巍C刻旃鄄煜赴で榭觯鄙ぷ詈玫氖笛樽樵细胞细胞贴壁超过培养板底面积%时吸出培养液,用含的ヒ鹊鞍酌赶⑹占赴垂潭ㄏ赴ǘ却肱嘌俊传代后以后每灰阂淮危鄙ぷ詈玫氖笛樽橄赴诔嘌瓶底面积%一%时按固定细胞浓度个/ù慷燃ú捎昧魇较赴醴治觯ケ攴ḿ觳獾谌昙堑耐每故驝蚉昙的兔抗鼠、魑1昙俏铮叫卸哉兆槲<尤胪投哉湛固的?悸堑绞笛榈男枰R约把芯可敖锥问奔溆邢蓿谎≡癫用优化方案进行培养的写慷燃ā亩嘞蚍只ǘ訫进行向骨细胞、脂肪细胞的定向诱导分化,验证其具有干细胞的多向分化潜能,用茜素红和油红色检测诱导分化结果。同样只选择采用优化方案进行培养的多向分化能力鉴定。梦⒒肪程逡神经元原代培养上清液杏盏迹∮盏后的魑J笛楸瓯尽6云浣行翁Ч鄄欤幻庖呦赴Ъ觳馍经元特异性标志物神经元特异性烯醇化酶及神经丝蛋白琋的表达情况,同时进行免疫荧光分析。隔重庆医科大学硕士研究生学位论文
结果:∈蠹涑渲首嫦赴体外优化培养原代培养螅杉嘌髅蟮撞坑邢赴谏ぃ栽残魏捅折光性强,细胞间无重叠,有接触抑制现象;传代后细胞形态趋于一致,大部分为梭形,排列紧密,生长旺盛。当某个实验组细胞贴壁超过底面积%.%时,对所有细胞进行传代计数,观察=、排除了造血干细胞影响的嘞蚍只芰在用优化方案培养的ㄏ蛴盏汲晒窍赴氖笛橹校ü缢红染色发现诱导后细胞外基质中大量钙盐沉积;在定向诱导成脂肪细胞的实验中,通过油红旧ǚ⑾窒赴谐鱿值闹伪蝗境傻阕春焐ǎ表明我们得到的芟蚬窍赴⒅鞠赴只K得魑颐堑玫降氖活性好、具有多向分化能力的逋庀蛏窬Q赴ㄏ蛴盏挤只圆形为主,筇谙赴鸾テ炭#纬伤笮位蚨嘟切危翁ヂ现在每一代的细胞计数中,/%ヅQG遄榈南胞数量都超过其他各组,通过统计学检验验证/%/%ヅQG甯欣贛的体外培养增殖。优化方案培养的泶锛渲氏赴昙荂重庆医科大学硕士研究生学位论文气
经诱导螅琈细胞形态发生变化,自胞体有突起长出,各细胞突起长短不一,类似神经元。免疫细胞化学检测结果表明,诱导后腘及ィ簍:均阳性表达;免疫荧光检测也证实免疫细胞化学检测的结果。结论笛橹っ鳎肈疐胎牛血清为培养液进行小鼠密质骨来源的逋馀嘌钣欣谄涫康睦┰觯玫降氖峭源性好、纯度高、增殖活力强、具有多向分化潜能的赴骸ü⒒肪程逡神经元原代培养上清液盏嫉姆椒芄皇小鼠密质骨来源的ㄏ蚍只I窬Q赴关键词:间充质祖细胞,优化培养,诱导分化,神经元样细胞。重庆医科大学硕士研究生学位论文
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