氨基酸的薄层层析--实验报告.doc

生物化学实验报告
姓名:

学号:

专业年级:

组别: 第四实验室
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称
氨基酸的薄层层析
实验日期
2015-11-09
实验地点
第四实验室
合作者
指导老师
评分
教师签名
批改日期
一、实验目的
。
,包括制板、点样、层析、显色。
(Rf值)来鉴定被分离的物质(本实验中即氨基酸混合液)。
二、实验原理
:本实验将硅胶作为固相支持物,羧***纤维素钠作为黏合剂,两者的混合物作为固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。当液相展开溶剂在固定相上流动时,由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样、不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样,点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同,通过吸附-解吸-再吸附-再解吸的反复进行,混合液中的氨基酸可以彼此分开。
:层析用硅胶是一种多孔性物质,它的硅氧环交链结构表面上密布极性硅醇基(-Si-OH),这种极性的硅醇基能和许多化合物形成氢键而产生吸附。硅胶的吸附能力比氧化铝稍弱,其吸附活性也与含水量呈负性相关,故涂布操作前必须保证平板足够干燥。硅醇基显较弱的酸性,因而,硅胶只能用于中性、或酸性成分的分离,碱性成分不能用它分离,故混合氨基酸样品中的氨基酸组分均为中性或酸性氨基酸。硅胶的活化温度通常为105℃-110℃,不能过高,故活化过程中的烘干温度控制在70℃左右。
:茚三***水化后生成水化茚三***,它与氨基酸的羧基反应生成还原茚三***、氨基醛,与此同时,还原茚三***又与氨基茚三***缩合生成紫红色化合物而使氨基酸斑点显色。(氨基酸显色反应的化学方程式参见下图)
4. Rf值鉴定混合氨基酸中含的氨基酸种类:层析中,物质沿溶剂运动方向迁移的距离与溶液前沿的距离之比为Rf值。由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的,故移动速率(Rf值)也是恒定的,因此可以根据Rf值来鉴定被分离的物质。
三、材料与方法

:
(1)氨基酸标准溶液:,,
(2)混合氨基酸溶液:,,
:
硅胶、%的羧***纤维素钠、展层-显色剂(正丁醇、乙酸、水、茚三***溶液)
:
层析板、尺子、铅笔、药匙、玻璃棒、50ml小烧杯、10ml量筒、托盘天平、毛细玻璃管、层析缸、烘箱、吹风机

:
制作硅胶层析板
在层析板上点氨基酸样品
对氨基酸样品进行层析
对氨基酸样品进行显色
:
步骤
操作
(1)制作硅胶层析板
:称取硅胶3克,%的羧***纤维素钠8毫升,调成均匀的糊状。:取洁净的干燥玻璃板均匀涂层。:将玻璃板水平放置,室温下30min自然晾干。:70℃烘干30分钟。
(2)在层析板上加氨基酸样品
:用铅笔距底边2cm水平线上均匀确定4个点。每个样品间相距约