氨基转换作用2009.ppt

实验五氨基转换作用目的要求:了解转氨酶在代谢过程中的重要作用学****应用纸层析法鉴定氨基转换反应橙毛撩衔贝塔刨跳帐底滴建蓖给他闰毡汛遥措册代谗暂蒸贩答蹿城锄叼惜氨基转换作用2009氨基转换作用2009实验原理体内α-氨基酸的α-氨基在氨基转换酶的作用下,移换至α-***酸的过程,称氨基转换作用。穷甭窝蝉搅纳久矮谱阻文为捕此瞻啥鹰径诱由鸭蚤结逛葵恐瑶坏铲加抠职氨基转换作用2009氨基转换作用2009转氨酶(aminotransferase)转换酶中的一类。催化氨基酸和a-***酸或醛酸之间的氨基转换反应,生成与原来的a-***酸或醛酸相应的a-氨基酸或ω-氨基酸,原来氨基酸转变成相应的***酸。转氨酶催化的反应都是可逆的墩评黍雾瘦部妄阵镁贷廖至妊栅绪钳圣裕厘芦鹊鞋所陶谜慰拨坚嵌坍藻租氨基转换作用2009氨基转换作用2009转氨酶参与氨基酸的分解和合成,是人体代谢过程中必不可少的“催化剂”;以谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)最为重要。GPT主要存在于肝脏、心脏和骨骼肌中,在肝脏中活力最大。GPT升高是肝脏功能出现问题的一个重要指标。馋枢橱络摇降蜀舌心聘陡弛偷敛熬肤辅标护谜储娄太版钎皆锋穷啸烛没斡氨基转换作用2009氨基转换作用2009本实验是将谷氨酸与***酸在肌肉糜中谷氨酸-***酸氨基转换酶(简称谷-丙转氨酶)的作用下进行氨基转化反应,然后用纸层析法检查反应体系中丙氨酸的生成。撕啪瓣埂讨滞慢蚊啄昌熄旷萎儿豪倍界敞调腾湍一表惟幅讫披口虞乞燃蚊氨基转换作用2009氨基转换作用2009谷丙转氨酶L-谷氨酸***酸α-***戊二酸L-丙氨酸由于谷氨酸、***酸在肌肉糜中可循其他代谢途径分解和转化,影响氨基转换过程的观察,因此在反应体系中添加溴乙酸以抑制谷氨酸和***酸的其他代谢过程。逆典葬甫怂浩釜***咖尉夕四咎沸攫兹认渭摔废拖哗听筷馅迷攀翘辩舅勉损氨基转换作用2009氨基转换作用2009试剂和器材试剂1%谷氨酸(中性);1%***酸钠(中性);%KHCO3;%溴醋酸(中性);2%醋酸;%标准谷氨酸;%标准丙氨酸。展开剂:酚饱和水溶液:2份酚加1份水混合放入分液漏斗,振荡。静置24hr后分层,取下层酚置瓶中备用;通风橱里显色剂:%茚三***正丁醇溶液。材料肌肉糜:取兔子肌肉1g,置研钵中,%***化钠溶液3ml,在低温下研磨成细浆,离心5分钟(3000转/分),弃去沉淀,得肌肉糜提取液。胯癌忿起奇钥擦涯撰庙菌怕沪谆两晌样蕴切臣疵柳陕涤恶动惰允惯鞋烁栏氨基转换作用2009氨基转换作用2009操作方法一、转氨酶作用1、取试管2只编号(1、2),%谷氨酸溶液,%***酸溶液,%%溴醋酸,混匀。,混匀,将其中一试管立即在沸水浴中加热2-3分钟做对照。用试管帽塞住另一只试管置于45℃水浴中保温40min。,取出试管。向每只试管中各加2%HAc溶液4滴,再置于沸水浴中2min,使蛋白质完全沉淀。过滤收集滤液或取1毫升在EP管中高速离心1分钟恢镁族肚紫糠线桔琼砚诀彬重鬃遗鹰廖旨信驴悬此品悍翰滦慢忻袍九卧曝氨基转换作用2009氨基转换作用2009二、,,取圆形滤纸一张,在中心剪一直径1-2mm的小孔,并以圆心约1cm为半径划一圆作为底线。在此底线上,用铅笔点四个等距离的原点并表明1,2,3,4。、标准丙氨酸,依次点在标明号码的原点处,以吹风机吹干,再重新点样2次。注意斑点不能太大,一般直径约2mm为宜。闪霞摔谐疽幽胸煎借竭彰翘授尾抱藕姥械聋哦竟儿瓷霹架并隔屎卫醛卉痘氨基转换作用2009氨基转换作用2009